医疗器械无菌检验常见问题答疑汇总

问1、疑似长菌的培养基转入新鲜培养基的操作环境是哪个房间？

答：由于疑似长菌是不确定供试品里真正有微生物存在，所以疑似长菌的培养基转入新鲜培养基操作环境，仍然要求在百级条件下进行操作，以防环境不符合要求带来污染，导致试验结果不准确，以免造成误判、错判。

问2、供试品无菌检查时做阳性对照试验，阳性对照应在无菌室还是阳性对照室操作？

答：供试品无菌检查时要求做阳性对照试验，阳性对照管是分别需要两个环境间才能完成。在无菌室是接种规定量供试品；在阳性室则是接种不大于100cfu对照菌悬液。

问3、培养基已经有质量报告，培养基还需要做无菌性和灵敏度检查吗？

答：培养基即使有质量报告，新购买培养基的无菌性和灵敏度检查需要再验收。因为培养基是微生物试验的基础，若培养基的无菌性或灵敏度不符合规定，则检验结果应无效。《中国药典》2020版培养基质量管理要求应建立接收标准并进行符合性验收，包括品名、批号、数量、生产单位、外观性状、处方和使用说明，有效期、贮藏条件、生产商提供的质量报告等。

问4、生孢用FTM计数培养18小时了，现在还未长，33摄氏度培养，是什么原因呢?

答：注：由于学员所提问的题目描述不够完整，无法完成答题。那么，那就科普一下有关生孢梭菌生物学特性和培养注意事项吧：生孢梭菌是革兰氏染色阳性菌，以周身鞭毛运动，为一群严格厌氧芽孢梭菌，电镜下细胞大小(0.3～0.4)μm×(1.4～6.6)μm。呈梭状芽孢杆菌，两端钝圆，单个或短链存在。在FTM固体培养基上菌落直径2～6mm，中部突起，白色至淡黄色，边缘假根状，半透明，表面无光泽。

生化试验：能分解蛋白质和糖类。发酵葡萄糖和麦芽糖，产丁酸和少量乙酸等。存在于土壤、伤口和肠道内。属于亚硫酸盐还原梭状芽孢杆菌，过氧化氢酶阴性。

培养注意事项：在FTM固体培养基上操作时，因氧气会对厌氧菌产生毒害作用，因此整个操作过程应在专门的无氧设备中进行。如在正常空气中操作，从厌氧菌暴露在空气中开始到放入厌氧环境中培养结束，整个过程应尽可能快速操作，一般不超过15分钟，暴露时间越长，厌氧菌越容易死亡，不容易成功。需在厌氧条件下接种，培养温度为30～35度，可采用厌氧罐、厌氧培养箱、厌氧产气包等方式提供厌氧环境，除了确保气体环境无氧之外，有些厌氧菌通常还需要5%-10%的二氧化碳、氢气等气体促进生长并提高厌氧菌对氧气的耐受性，更容易培养成功。在装量为50mlFTM流体培养基试管中（无需厌氧环境培养），生长的微生物分散成小米状，注意菌数点计选择在30～50之间，否则菌数太多无法计数。

问5、阳性间传递窗对室外是正压吗？

答：是的。