作为一名药物研发分析工作人员，相信你在平时工作中经常会遇到一些色谱峰前延、峰展宽、甚至峰分叉现象。导致峰形不好的原因有很多，其中一种可能的原因就是溶剂效应造成。
从概念上讲溶剂效应亦称“溶剂化作用”。指液相反应中，溶剂的物理和化学性质影响反应平衡和反应速度的效应。通俗的讲也就是样品溶解所使用的溶剂在液相色谱系统造成的一种效应。最本质的原因就是流动相和稀释液的某种不匹配导致。一般会造成色谱峰展宽、分叉、肩峰、保留时间漂移、峰面积变化等现象。
一般稀释液和流动相越不一致，样品浓度约高，进样体积越大，越容易发生溶剂效应问题，所以检查是否为溶剂效应最简单的方法就是降低进样体积重复进样一针，如果峰形变好则为溶剂效应导致。
今天和大家一起分享下我遇到的溶剂效应的五个典型案例，包括了色谱峰展宽、分叉、肩峰、保留时间漂移、峰面积变化现象，希望能够引起大家在遇到类似问题时能联想到是溶剂效应原因造成的。
案例1：常规性质的溶剂效应：稀释液极性强度小于流动相。
主要色谱条件：
图1:稀释液为80%乙腈；杂质出峰时流动相比例约为50%乙腈，进样20μl 图2:进样5μl，其他同图1条件。
从图中看出三个杂质峰均出现不同程度的前延现象，且从左到右三个峰的前延效果依次减弱，再根据所采用稀释液和流动相，基本就能判断出是因为稀释液不匹配导致的。当进样体积减小，峰型就变好，则肯定就是容积效应问题。此时如果还想获得一个好的峰型只要降低进样体积或者更换低比例有机相稀释液即可。
案例2：稀释液极性强度大于流动相极性造成的溶剂效应
主要色谱条件：
图1：10%甲醇为稀释液；标计的杂质出峰时流动相比例约为99%甲醇; 图2：更改稀释液为30%甲醇，其他同图1条件。
从图中可以看出标记峰的峰形出现前沿现象（其它几个峰也有一些），特别是第一个峰，效果最为明显。这种溶剂效应平时不多见，开始我们遇到该现象时并没有立刻联想到溶剂稀释液的问题，因稀释液极性已经很大了，开始考虑为色谱柱使用时间太长了导致，后来更换色谱柱也是同样的效果。偶然一次用错了稀释液却给出了很好的峰形，后来经测试进行降低进样体积确实能改善峰形。所以有些化合物即使在稀释液极性强度大于流动相极性时也会产生溶剂效应，造成峰形前延的问题。
案例3：稀释液中的某种基质导致的溶剂效应
图1：对照品溶液; 图2：对照品+供试品溶液
在该案例中，两个样品的检测条件均相同，但进样对照品溶液每个杂质出峰都没有问题，而加标供试品进样后，前面两个化合物的色谱峰就变差，第一个变矮胖，第二个更明显直接变肩峰。经分析发现主要原因为配置供试品浓度太大，制剂中含有一种脂溶性的辅料，导致稀释液的极性发生了变化，造成了溶剂效应问题。后将进样体积降低后峰形变好。
案例4：溶剂效应导致杂质的峰面积变化问题
图1：化合物的峰面积为14.470；稀释液为25%乙腈; 图2：化合物的峰面积为11.550；稀释液为75%乙腈; 图3：稀释液为75%乙腈，提高化合物的浓度。
在进行一个项目研究时，发现将稀释液更改后化合物的峰面积却发生了变化（在同一台液相检测）；而重新配置样品重复性较好。经对比化合物的峰形，图1峰形较好，图2峰形变矮。后将样品浓度提高，使用75%乙腈为稀释液测定发现峰形前延更厉害（图3）。所以推断峰面积变化的原因为峰迁延导致积分不准确，此也为溶剂效应导致的问题。
案例5：溶剂效应导致杂质峰保留时间漂移问题
图1：供试品酸破坏溶液，样品先加50%乙腈2ml使溶解，加1M盐酸2ml破坏，后加1M氢氧化钠2ml中和，用50%乙腈定容（理论推断破坏杂质2.605min应为杂质A）。图2：杂质A对照品溶液：直接用50%乙腈溶解; 图3：杂质A对照品溶液，按供试品破坏的方式配制。图4：图1-3重叠效果。
该案例发现来源于一个破坏杂质的定位，根据API的结构推断在酸性条件应该破坏出杂质A，但是在使用杂质A进行定位时保留时间一直对不上，总是有些差别(图1和图2)，因其出峰较早，所以保留时间的差异算是比较大了。后将杂质A使用API破坏方式相同的步骤进行操作，结果其保留时间和API破坏的峰完美重合（图3和4）。经对比分析杂质A保留时间差异主要为两种稀释液的微弱不同导致。该案例展现为稀释液不一致导致了保留化合物保留时间改变，也是一种溶剂效应的范畴。
以上为大家分享的5个关于溶剂效应的案例，每个情况虽有不同，但最终原因都归因于稀释液导致的溶剂效应问题。希望能够对大家在试验过程中出现类似问题时提供一些帮助。
参考文献：
[1] ZMJ.高效液相色谱中溶剂效应理论.药事纵横.
[2]彩云.一篇长文让您完全理解液相色谱中的溶剂效应.色谱与质谱.。
