随着技术的不断进步和全球药品监管标准的提升，2025年版药典对高效液相色谱法（HPLC）及其相关项进行了多项重要调整。

作为药物研发和质量控制的关键技术，HPLC在药典中的标准化至关重要。从2020年版到2025年版的药典更新中，我们可以看到该技术在适用范围、仪器要求、操作规程等方面均有所优化和改进。

从HPLC在药典内的整体应用上

1. 方法范围的扩展

2025年版药典：增加了对部分新药和生物类似药的HPLC分析方法，以适应新药开发的需求。

eg1：新增了多个针对生物技术产品（如利妥昔单抗）的HPLC分析方法，尤其是单克隆抗体药物和重组蛋白类药物。这些新方法包括特殊的色谱条件和检测策略，用于测定这些大分子药物的纯度、杂质以及生物活性。

eg2：对于中药领域，特别是包含了多组分的分析方法，这些方法能同时分析多种活性成分，有助于控制中药复方制剂的质量。

2020年版药典：更多关注传统化学药物的HPLC应用。

2. 仪器要求的优化

2025年版药典：规定了更详细的色谱柱和检测器选择指南，以提高分析的灵敏度和分辨率。

2020年版药典：侧重于仪器操作的稳定性和重现性。

3. 操作规程的细化

2025年版药典：提供了更为详尽的操作步骤和条件调整建议，包括色谱参数的选择和样品处理的细节（包括样品的提取、净化、浓缩和溶解等步骤），旨在减少误差并提高结果的一致性。

2020年版药典：更通用的方法描述，较少涉及具体的操作细节。

4. 数据处理与统计

2025年版药典：增强了数据处理和统计分析的部分，强调使用先进的统计软件进行结果解释，且看重数据完整性，特别是对数据完整性和审计追踪的要求，并提出了对电子记录和电子签名的要求，符合国际药品监管标准。

2020年版药典：更多依赖基本的数据处理手段，如计算平均值和标准偏差。

具体到《0512高效液相色谱法草案第二次公示稿》

1.分离度

USP与Ph. Eur. 已删除峰宽的计算公式，仅保留了半高峰宽的计算公式。而2025年公示稿则同时保留了两种计算方式，且与上述药典公示保持一致。

而理论塔板数和分离度均提供了峰宽和半高峰宽两种计算公式。但在有异议时，判定标准均为以半高峰宽的计算结果为准。

2.峰谷比

新增参数旨在替代分离度参数在特定情况下的不适用性，例如当两种物质浓度差异显著或峰宽较大时，仅依赖分离度难以准确评估分离效果。尽管为新引入的参数，其在USP与Ph. Eur. 中已有相关描述，并且液相色谱软件能够自动计算该值。工作过程中，只需遵循规定进行计算，特别注意在计算峰谷比时，应采用水平向右积分方式，确保小峰基于平行外推基线。

3.灵敏度

以灵敏度溶液来计算信噪比的方式不再适用。