孔雀石绿是一种工业染料，具有良好的杀菌抑菌作用，被广泛用于活鱼的保鲜。但孔雀石绿具有高毒性、高残留风险，可带来致癌、致畸、致突变作用，已被农业部禁止用于养殖环节。根据近日国家食药总局的公告，本次共抽检鲜活水产品808批次，检出不合格样品69批次，其中孔雀石绿不合格水产品46批次，占不合格总数近七成。说明孔雀石绿仍在被广泛非法使用。本实验使用免疫层析胶体金法快速检测活鱼肉中的孔雀石绿残留。

检测原理

孔雀石绿残留检测试纸条应用了竞争抑制免疫层析的原理， 样本中的孔雀石绿在流动的过程中与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合， 抑制了抗体和 NC 膜检测线（ T 线） 上的孔雀石绿—BSA 偶联物的结合，从而导致检测线颜色的变化。 当样本中没有孔雀石绿或孔雀石绿低于检测限时， T 线显色强于C 线或与 C 线显色无差异； 当样本中的孔雀石绿超过检测限时， T 线不显色或明显弱于 C 线； 而无论样本中是否含有孔雀石绿， 质控线（ C 线） 都会显色， 以示检测有效。

适用范围

本产品适用于水产中孔雀石绿的定性检测。

检测限

显性孔雀石绿： 1ng/ml (ppb) 隐性孔雀石绿 1ng/ml (ppb)

结晶紫： 1ng/ml (ppb) 隐性结晶紫 1ng/ml (ppb)

样本收集和前处理

实验过程中， 用红色标记笔进行标记， 黑色标记笔含有结晶紫， 会对该实验造成污染。

鱼、 虾样本前处理方法：

（1） 用均质器均质组织样本；

（2） 称取 1.0±0.05g 均质物至 10ml 聚苯乙烯离心管中， 加入 1ml 去离子水，涡动 2min， 加入 100 ml 孔雀石绿提取剂 1， 再加入 1 瓶孔雀石绿提取剂 2， 涡动 2min， 3000rpm 以上， 室温（ 20-25℃） 离心 5min；

（3） 取 1ml 上清液至 10ml 聚苯乙烯离心管中，加入 50ml 孔雀石绿氧化剂,涡动 15s， 于 50～60℃水浴氮气或空气流下吹干；

（4）加入 0.3ml 样本复溶液涡动溶解 3min，取 100 ml 用于分析。【备注：复溶过程中垂直加入一支 250ul吸头以辅助涡旋溶解】

操作步骤

（1） 从原包装中取出试剂桶， 打开后取出所需数目的微孔试剂和试纸条，并做好标记。 请在 60min 内尽快使用。所需微孔试剂取出后，请立即盖好试剂桶盖，防止受潮。

（2） 用微量移液器吸取 100 ml待检样本溶液于微孔中，缓慢抽吸且充分与微孔中试剂混匀。

（3） 室温（20~25℃）孵育 3min 后，吸取混匀液约 100ul 垂直滴于加样孔（S 孔） 中。

（4） 液体流动时开始计时，反应 10min，根据示意图判定结果，其他时间判定无效。

结果判定

阴性（ -） ： T 线显色强于 C 线显色或与 C 线显色无明显差异， 表示水产样本中不含有待检物或其

浓度低于检测限。

阳性（ +） ： T 线显色明显弱于 C 线显色或 T 线不显色， 表示水产样本中待检物浓度等于或高于检

测限。

无 效 ： 未出现 C 线， 表明不正确的操作过程或试纸条已失效。

在此情况下， 应再次仔细阅读说明书， 并用新的试纸条重新测试。