摘 要： 建立气相色谱法测定盐酸氯丙嗪注射液中5种抗氧化剂。采用乙酸乙酯作为提取溶剂，HP-1701毛细管色谱柱分离，分流比为10∶1，用氢火焰离子化检测器（FID）检测，色谱峰面积外标法定量。5种抗氧化剂能实现完全分离，其质量分数在0～100 μg/mL范围内与色谱峰面积有良好的线性关系，相关系数均大于0.999，检出限为2.0~4.0 mg/kg，定量限为5.0~9.0 mg/kg。样品加标回收率为89.36%～95.92%，测定结果的相对标准偏差均小于8%（n=6）。该方法可满足盐酸氯丙嗪注射液中5种抗氧化剂含量的检测。

关键词： 气相色谱法； 盐酸氯丙嗪注射液； 抗氧化剂

盐酸氯丙嗪注射液是一种吩噻嗪类抗精神病药，对兴奋躁动、幻觉妄想、思维障碍及行为紊乱等阳性症状有较好的疗效，用于治疗精神分裂症，躁狂症或其他精神病性障碍，也可治疗各种原因所致的呕吐或顽固性呃逆[1‒4]。

盐酸氯丙嗪具有吩噻嗪母核，环中的S和N原子都是良好的电子给予体，易被氧化。盐酸氯丙嗪注射液在日光作用下可引起氧化反应，使注射液pH降低[2‒6]，因此盐酸氯丙嗪注射液中常需加入一定量的抗氧化剂，用以阻止其氧化变质。然而，某些抗氧化剂的不当使用可能会影响药效甚至诱发一些疾病。为规范抗氧化剂的科学使用，建立相应的检测方法具有十分重要的意义[7]。

目前，对于食品、饲料等产品中抗氧化剂含量检测文献甚多[8‒15]，但针对药物制剂中多种抗氧化剂的检测方法较为鲜见，已有药品中的检测方法局限于少数几类抗氧化剂。笔者建立了气相色谱（GC）法同时测定盐酸氯丙嗪注射液中丁基羟基茴香醚(BHA)、二丁基羟基甲苯(BHT)、叔丁基对苯二酚(TBHQ)、植酸、硫代二丙酸甘油酯5种抗氧化剂，该方法大幅缩短分析时间，提高了检测效率，为保障盐酸氯丙嗪注射液的质量安全以及避免抗氧化剂在盐酸氯丙嗪注射液中的滥用提供技术手段。

1、 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

气相色谱仪：GC-2030型，配FID检测器，日本岛津公司。

纯水/超纯水一体化系统：Milli-Q Direct-Q8型，美国密理博公司。

电子分析天平：BSA224S型，感量为0.1 mg，德国赛多利斯公司。

丙酮、乙酸乙酯：均为色谱纯，上海安谱实验科技股份有限公司。

氯化钠：分析纯，中国医药集团有限公司。

丁基羟基茴香醚(BHA)标准物质：100 mg，质量分数为98%，标准物质编号为IR-20908，北京坛墨质检标准物质中心。

二丁基羟基甲苯(BHT)溶液标准物质：1 000 μg/mL，溶剂为甲醇，标准物质编号为GBW (E)100651，北京坛墨质检标准物质中心。

叔丁基对苯二酚(TBHQ) 溶液标准物质：1 000 μg/mL，溶剂为甲醇，标准物质编号为90984JC，北京坛墨质检标准物质中心。

植酸标准物质：100 mg，质量分数为98%，标准物质编号为1ST2315，北京坛墨质检标准物质中心。

硫代二丙酸甘油酯标准物质：100 mg，质量分数为99%,，标准物质编号为MFCD00002780，德国默克公司。

盐酸氯丙嗪注射液样品：武汉远大制药集团有限公司。

实验用水为二级纯水。

1.2 标准溶液的配制

1.2.1 混合标准储备溶液

分别准确称取BHA、植酸、硫代二丙酸甘油酯标准物质10.0 mg于10 mL容量瓶中，再分别准确移取BHT、TBHQ溶液标准物质1.0 mL于同一10 mL容量瓶中，以丙酮溶解并定容，涡旋混匀，得到各组分质量浓度为100 μg/mL的混合标准储备溶液。

1.2.2 系列混合标准工作溶液

分别准确移取0、0.1、0.2、0.4、0.5、1.0 mL混合标准储备溶液于1.0 mL容量瓶中，以丙酮稀释并定容，得到各组分质量浓度均分别为0、10、20、40、50、100 μg/mL的系列混合标准工作溶液。

1.3 气相色谱条件

色谱柱：HP-1701型毛细管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm，美国安捷伦科技有限公司）；进样口温度：280 ℃；分流比：10∶1；升温程序：初始温度为50 ℃，保留1 min，然后以5 ℃/min速率升温至150 ℃，再以10 ℃/min速率升温至280 ℃，保持6 min；FID温度：300 ℃。

1.4 实验方法

准确称取盐酸氯丙嗪注射液样品2 g，置于塑料离心管中，加入1 mL蒸馏水与1 g氯化钠溶解后，再加入5.0 mL乙酸乙酯提取，以5 000 r/min转速离心5 min，取上清液，将残渣重复提取1次，合并上清液，氮吹至近干，加入1.0 mL丙酮溶解，过0.22 μm滤膜后，供气相色谱分析。同时进行空白实验，以外标法定量。

2、 结果与讨论

2.1 提取溶剂的选择

BHA、BHT、TBHQ、植酸、硫代二丙酸甘油酯5种抗氧化剂属中等极性化合物，实验室常见可供选择的提取试剂有乙醚、乙酸乙酯、乙腈、二氯甲烷等。考察上述5种常见有机溶剂对盐酸氯丙嗪注射液中5种抗氧化剂的提取效率见图1。由图1可知，在相同加标水平（10 mg/kg）下，采用乙酸乙酯作为提取溶剂，5种抗氧化剂的加标回收率均较为理想，水平均90%以上，其整体提取效率要优于其他4种有机试剂，因此选择乙酸乙酯作为提取溶剂。

图1   使用不同提取溶剂时5种抗氧化剂的回收率（n=3）

Fig. 1   Effect of different extraction solvents on the recovery rates of 5 antioxidants with spiking （n=3）

2.2 提取溶剂体积

提取溶剂体积的选择需同时考虑取样量与检测灵敏度两个因素。当提取溶剂体积较小时，组分的浓度就较高，检测灵敏度自然也高；而当提取溶剂体积偏小时，样品被提取不完全，回收率不能满足试验要求，影响检测结果准确性。试验考察提取溶剂体积分别为1、2、5、10 mL时，5种抗氧化剂的检测灵敏度及回收率。结果表明，当提取溶剂体积分别为1、2 mL时，5种抗氧化剂的回收率均低于80%；当提取溶剂体积分别为5、10 mL时，5种抗氧化剂的回收率均高于90%。考虑到检测灵敏度、经济成本等因素，最终设定取样质量为2 g，提取溶剂的体积为5 mL。

2.3 氯化钠添加量

氯化钠的加入能够降低5种抗氧化剂在试样中的溶解程度，从而更容易被提取出来。向空白试样中加入一定量的5种抗氧化剂混合标准溶液，保持其他条件不变，考察5种抗氧化剂的回收率，结果见图2。由图2可知，随着氯化钠添加量的逐步增加，5种抗氧化剂的色谱峰面积均有所增大。当氯化钠加入质量为1 g时，样品溶液中氯化钠已趋于饱和，5种抗氧化剂加标回收率达到最高，因此选择氯化钠添加量为1.0 g。

图2   不同氯化钠添加量对应的5种抗氧化剂回收率（n=3）

Fig. 2   Effect of sodium chloride addition on the recovery rates of 5 antioxidants with added standards （n=3）

2.4 色谱柱的筛选

采用HP-5毛细管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）、HP-1701毛细管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）、HP-INNOWAX毛细管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）3种常见毛细管色谱柱进行试验。结果表明，HP-1701毛细管色谱柱对5种抗氧化剂分离效果良好，HP-INNOWAX毛细管色谱柱分离效果最差，而HP-5毛细管色谱柱对于植酸、TBHQ两个组分的分离效果较差。因柱箱升温程序对各目标物的分离也有一定影响，经过多次试验摸索发现，依据1.3色谱条件，5种抗氧化剂分离效果佳，各组分峰形良好，混合标准溶液色谱图见图3。

  4—植酸；5—硫代二丙酸甘油酯图3　5种抗氧化剂混合标准溶液气相色谱图

Fig. 3   Gas chromatograms of 5 mixed standard solutions of antioxidants

t/min ；1—BHA；2—BHT；3—TBHQ；

2.5 分流比的选择

一般来说，分流比设置得越低，检测的灵敏度越高。在气相色谱图上TBHQ与植酸出峰位置接近，互相间容易产生干扰，从而影响两者的分离效果，造成二者检测结果的不准确。通过反复试验摸索，最终设置分流比为10∶1时效果较佳，不仅提高了检测灵敏度，同时保证了目标物的分离度，提升检测结果的准确度，因此设置分流比为10∶1。

2.6 线性关系、检出限及定量限

取一定量的5种抗氧化剂系列混合标准工作溶液于进样小瓶中，采用所建方法进行分析，分别以5种抗氧化剂标准溶液的质量浓度（x）为横坐标,对应色谱峰面积（y）为纵坐标，绘制标准工作曲线。以3倍信噪比对应的标准溶液的浓度折算成样品中的质量分数作为方法检出限，以10倍信噪比对应的标准溶液的浓度折算成样品中的质量分数作为定量限。5种抗氧化剂质量浓度线性范围、线性方程、相关系数、检出限及定量限见表1。由表1可知，5种抗氧化剂的质量浓度在0～100 mg/L范围内与色谱峰面积具有良好的线性关系，相关系数均大于0.999。检出限为2.0~4.0 mg/kg，定量限为5.0~9.0 mg/kg。

表1   5种抗氧化剂线性关系、检出限及定量限

Tab. 1   Linear relationship, detection limit, and quantification limit of 5 antioxidants

2.7 样品加标回收试验

取未检出5种抗氧化剂的空白盐酸氯丙嗪注射液，以10、20、100 mg/kg水平分别加入混合标准溶液，按1.4步骤处理并平行测定6次，试验结果见表2。由表2可知，5种抗氧化剂回收率为89.36%~95.92%，测定结果的相对标准偏差均小于8%，表明该方法准确度较高且精密度良好。

表2   样品加标回收试验结果（n=6）

Tab. 2   Precision and spiked recovery test results (n=6)

3、 结语

通过优化提取溶剂、氯化钠添加量、色谱柱型号以及分流比等试验参数，建立了气相色谱法同时测定盐酸氯丙嗪注射液中5种抗氧化剂含量。该方法具有灵敏、快速、重现性好等特点，可应用于盐酸氯丙嗪注射液中抗氧化剂成分的快速定量检测，为保障药物制剂的质量安全提供技术手段。

参考文献：

1 郝旭峰. 生物样本中雌二醇和盐酸氯丙嗪检验新方法的研究［D］.石家庄：河北医科大学，2022.

    HAO Xufeng. A new method for the determination of estradiol and chlorpromazine hydrochloride in biological samples［D］. Shijiazhuang：Hebei Medical University， 2022.

2 李军德，梅浩男，宋吉英.色素络合荧光法检测饲料中的盐酸氯丙嗪和奋乃静［J］.饲料工业，2020，41（18）：42.

    LI Junde， MEI Haonan， SONG Jiying. Determination of chlorpromazine hydrochloride and perphenazine in feed by pigment complexation fluorescence method ［J］. Feed Industry， 2020，41（18）：42.

3 王瑜. Cu（Ⅱ）-铬天青S分光光度法测定盐酸氯丙嗪［J］.沧州师范学院学报，2020，36（2）：5.

    WANG Yu. Determination of chlorpromazine hydrochloride with Cu-chromazurol S by spectrophotometry［J］. Journal of Cangzhou Normal University， 2020，36（2）：5.

4 王晓玲，刘建波，张萍.共振瑞利散射光谱法测定药物中的盐酸氯丙嗪［J］.化学与生物工程，2018，35（10）：60.

    WANG Xiaoling， LIU Jianbo， ZHANG Ping. Determination of chlorpromazine hydrochloride in drugs by resonance rayleigh scattering spectroscopy ［J］. Chemical and Bioengineering， 2018，35（10）：60.

5 张雪莲.小剂量盐酸氯丙嗪穴位注射治疗神经衰弱失眠的临床疗效［J］.数理医药学杂志，2016，29（8）：1 218.

    ZHANG Xuelian. The clinical efficiency of small dose of acupoint-injection therapy with chlorpromazine hydrochloride in the treatment of neurasthenia insomnia［J］. Journal of Mathematical Medicine， 2016，29（8）：1 218.

6 徐丽婷，张娟红，孙爱军，等.超快速液相色谱-质谱/质谱联用法测定氯丙嗪制剂中氯丙嗪含量［J］.兰州大学学报（医学版），2015，41（2）：46.

    XU Liting， ZHANG Juanhong， SUN Aijun， et al. Ultra faster method for the quantification of chlorpromazine in chlorpromazine preparation using UFLC-MS/MS［J］. Journal of Lanzhou University （Medical Edition）， 2015，41 （2）：46.

7 付琳.物源性抗氧化剂在食品保存中的角色与机制分析［J］.现代食品，2023，29（22）：86.

    FU Lin. Analysis of role and mechanism of biogenic antioxidants in food preservation ［J］. Modern Food， 2023，29（22）：86.

8 吴慧珊，唐菁，宁新霞，等.高效液相色谱法测定抗氧化剂BHT及其氧化产物BHTOOH的含量［J］.化工技术与开发，2024，53（Z1）：67.

    WU Huishan， TANG Jing， NING Xinxia， et al. Determination of antioxidant BHT and its oxidation product BHTOOH by high performance liquid chromatography ［J］. Chemical Technology and Development， 2024，53（Z1）：67.

9 连秋燕，黄宗雄，陆东东，等.气相色谱-质谱法测定纺织品中的抗氧化剂2246［J］.中国纤检，2023（10）：51.

    LIAN Qiuyan， HUANG Zongxiong， LU Dongdong，et al. Determination of antioxidants 2246 in textiles by gas chromatography mass spectrometry ［J］. China Fiber Inspection， 2023 （10）：51.

10 张慧敏.高效液相色谱法快速筛查饲料中14种禁用和限用抗氧化剂［J］.中国饲料，2023（12）：72.

    ZHANG Huimin. Rapid screening of 14 prohibited and restricted antioxidants in feed by high performance liquid chromatography ［J］. China Feed， 2023 （12）：72.

11 汪强，殷宪超，阮艺静，等.高效液相色谱法测定食用植物油中抗氧化剂的含量［J］.理化检验（化学分册），2019，55（10）：1 215.

    WANG Qiang， YIN Xianchao， RUAN Yijing， et al. Determination of antioxidants in edible vegetable oil by high performance liquid chromatography［J］. Physical and Chemical Testing （Part B：Chemical Division）， 2019，55（10）：1 215.

12 韩焕美，闫荣军，张爱霞，等.高效液相色谱法测定食用植物油中6种合成抗氧化剂［J］.化学分析计量，2019，28（2）：89.

    HAN Huanmei， YAN Rongjun， ZHANG Aixia， et al. Determination of 6 synthetic antioxidants in edible vegetable oil by high performance liquid chromatography ［J］. Chemical Analysis and Meterage， 2019，28（2）：89.

13 周晓婷，曹小妹，张敬敬，等.溶剂梯度结合流速梯度洗脱—高效液相色谱法快速测定食用植物油中四种抗氧化剂［J］.粮食与油脂，2012，25（7）：32.

    ZHOU Xiaoting， CAO Xiaomei， ZHANG Jingjing， et al. Fast determination of four antioxidants in edible vegetable oil bv solvent gradient combined with velocity gradient elution-HPLC ［J］. Grain and Oil， 2012，25（7）：32.

14 刘倩怡，廖晓亮，周嘉明，等.超声提取-气相色谱-三重四极杆串联质谱法测定斑马鱼胚胎中对苯二胺抗氧化剂［J］.质谱学报，2023，44（2）：314.

    LIU Qianyi， LIAO Xiaoliang， ZHOU Jiaming， et al. Determination of p-phenylenediamine antioxidants in zebrafish embryos by gas chromatography-tandem mass spectrometry with ultrasonic extraction ［J］. Journal of Mass Spectrometry， 2023，44（2）：314.

15 李芳芳，梁秀清，张卉，等.分散液液微萃取-气相色谱法同时测定食醋中常用防腐剂和抗氧化剂［J］.中国食品卫生杂志，2023，35（3）：367.

    LI Fangfang， LIANG Xiuqing，ZHANG Hui，et al. Simultaneous determination of common preservatives and antioxidants in vinegar by gas chromatography combined with dispersive liquid-liquid microextraction［J］. Chinese Journal of Food Hygiene， 2023，35（3）：367.

引用本文： 朱玉婷，李灿，武蕊，等 . 气相色谱法测定盐酸氯丙嗪注射液中5种抗氧化剂［J］. 化学分析计量，2024，33（8）：7. (ZHU Yuting, LI Can, WU Rui, et al. Determination of 5 antioxidants in chlorpromazine hydrochloride injection by gas chromatography[J]. Chemical Analysis and Meterage, 2024, 33(8): 7.)