2015年9月23日，台湾地区“卫福部”发布部授食字第1041901616号公告，修正“食品中霉菌毒素检验方法－黄曲毒素之检验” 全文2点，并自即日生效。

1.适用范围：本检验方法适用于香辛料、油脂、花生、玉米、谷类及其制品中黄曲毒素B1、B2、G1及G2的检验。

2.检验方法：检体经萃取及净化后，以高效液相层析仪（high performance liquid chromatograph, HPLC）分析的方法。

2.1.装置：

2.1.1.高效液相层析仪：

2.1.1.1.检出器：荧光检出器（fluorescence detector）。

2.1.1.2.层析管：Cosmosil5C18-AR，5μm，内径4.6mm×25cm，或同级品。

2.1.1.3.光化学反应器：Knitted Reactor Coils（KRC）25-25，或同级品。

2.1.2.均质机（Homogenizer）：转速可达15000rpm以上并适用有机溶剂者。

2.1.3.粉碎机（Grinder）。

2.2.试药：氯化钠及Tween-20均采用试药特级；甲醇采用液相层析级；去离子水（比电阻于25℃可达18MΩ‧cm以上）；黄曲毒素B1、B2、G1及G2对照用混合标准品（浓度分别为1000、300、1000及300ng/mL）。

2.3.器具及材料：

2.3.1.离心管：50mL，PP材质。

2.3.2.容量瓶：2mL、10mL及20mL，褐色。

2.3.3.滤膜：孔径0.22μm，Nylon材质。

2.3.4.滤纸：WhatmanNo.1，直径11cm，或同级品。

2.3.5.玻璃纤维滤纸（Glass microfiber filters）：直径9cm。

2.3.6.免疫亲和性管柱（Immuno affinity column）：采用内含对黄曲毒素B1、B2、G1及G2具专一性单株抗体之Afla Test-P管柱，或同级品。

2.3.7.针筒过滤器（Syringefilter）：滤膜孔径0.22μm，PTFE材质。

2.4.试剂之调制：

2.4.1.50%甲醇溶液：

取甲醇与去离子水以50：50（v/v）之比例混匀。

2.4.2.60%甲醇溶液：

取甲醇与去离子水以60：40（v/v）之比例混匀。

2.4.3.80%甲醇溶液：

取甲醇与去离子水以80：20（v/v）之比例混匀。

2.4.4.10%Tween-20溶液：

取Tween-20与去离子水以10：90（v/v）之比例混匀。

2.5.移动相溶液之调制：

取甲醇与去离子水以45：55（v/v）之比例混匀后，经滤膜过滤，取滤液供作移动相溶液。

2.6.标准溶液之配制：

精确量取黄曲毒素B1、B2、G1及G2对照用混合标准品1mL，以50%甲醇溶液稀释并定容至20mL，作为标准原液。临用时取适量标准原液，以50%甲醇溶液稀释黄曲毒素B1及G1至0.1～50ng/mL，黄曲毒素B2及G2至0.05～15ng/mL，供作标准溶液。

2.7.检液之调制：

2.7.1.玉米、谷类及其制品：

将检体磨碎混匀后，取约50g，精确称定，置于均质机中，加入氯化钠5g及80%甲醇溶液100mL，以15000rpm均质2分钟，经滤纸过滤。精确量取滤液10mL，加去离子水40mL混匀，以玻璃纤维滤纸过滤。精确量取滤液10mL，注入免疫亲和管柱（流速控制1滴／秒），待滤液完全通过管柱后，以去离子水10mL流洗2次（流速控制1滴／秒），弃流出液，再以甲醇1mL冲提（流速控制1滴／秒），收集冲提液，以去离子水定容至2mL，经针筒过滤器过滤，供作检液。

2.7.2.油脂、花生及其制品：

将油脂等液态检体直接混匀，其他检体经磨碎混匀后，取约25g，精确称定，置于均质机中，加入氯化钠5g及60%甲醇溶液125mL，以15000rpm均质2分钟后，经滤纸过滤。精确量取滤液10mL，加去离子水30mL混匀，以玻璃纤维滤纸过滤。精确量取滤液20mL，注入免疫亲和管柱（流速控制1滴／秒），待滤液完全通过管柱后，以去离子水10mL流洗2次（流速控制1滴／秒），弃流出液，再以甲醇1mL冲提（流速控制1滴／秒），收集冲提液，以去离子水定容至2mL，经针筒过滤器过滤，供作检液。

2.7.3.香辛料：

将检体磨碎混匀后，取约25g，精确称定，置于均质机中，加入氯化钠5g及80%甲醇溶液100mL，以15000rpm均质2分钟，经滤纸过滤。精确量取滤液5mL，加10%Tween-20溶液20mL混匀，以玻璃纤维滤纸过滤。精确量取滤液4mL，注入免疫亲和管柱（流速控制1滴／秒），待滤液完全通过管柱后，以去离子水10mL流洗2次（流速控制1滴／秒），弃流出液，再以甲醇1mL冲提（流速控制1滴／秒），收集冲提液，以去离子水定容至2mL，经针筒过滤器过滤，供作检液。

2.8.鉴别试验及含量测定：

精确量取检液及标准溶液各50μL，分别注入高效液相层析仪中，依下列条件进行液相层析，就检液与标准溶液所得波峰之滞留时间比较鉴别之，并依下列计算式求出检体中各黄曲毒素之含量（ppb）：

Ｃ×Ｖ×Ｆ

检体中各黄曲毒素含量（ppb）＝ ────

Ｍ

C：由标准曲线求得检液中各黄曲毒素之浓度（ng/mL）

V：检体最后定容之体积（mL）

F：依2.7.1.节取样分析时，F为50

依2.7.2.节取样分析时，F为25

依2.7.3.节取样分析时，F为125

M：取样分析检体之重量（g）

高效液相层析测定条件：

层析管柱：Cosmosil5C18-AR，5μm，内径4.6mm×25cm。

光化学反应器：KRC25-25。

荧光检出器：激发波长360nm，发射波长440nm。

移动相溶液：依2.5.节所调制之溶液。

移动相流速：1.0mL/min。

附注：1.本检验方法之定量极限，于油脂、花生、玉米、谷类及其制品中，黄曲毒素B1及G1均为0.2ppb，黄曲毒素B2及G2均为0.1ppb；于香辛料中，黄曲毒素B1及G1均为1ppb，黄曲毒素B2及G2均为0.5ppb。

2.食品中有影响检验结果之物质时，应自行探讨。

3.以液相层析串联质谱仪（LC/MS/MS）进行确认时，其LC/MS/MS之多重反应侦测（multiplereactionmonitoring,MRM）模式参考参数如下表。

分析物

离子化模式

离子对

去集簇电压（V）

碰撞电压（eV）

前驱离子（m/z）＞产物离子（m/z）

黄曲毒素B1

ESI+

313＞241*

313＞285

48

48

36

22

黄曲毒素B2

ESI+

315＞259*

315＞287

46

46

28

26

黄曲毒素G1

ESI+

329＞200*

29＞243

46

46

42

26

黄曲毒素G2

ESI+

331＞189*

331＞313

48

48

42

24

*定量离子对

注：上述测定条件分析不适时，依所使用之仪器，设定适合之测定条件。

参考文献

1.Vicam,AflatestHPLCinstructionmanual.Milford,MA,USA.

2.卓宪骏、陈映君、廖家鼎、曾素香、高雅敏、周秀冠、陈惠芳。2014。香辛料中黄曲毒素之检验方法开发及调查。卫生福利部食品药物管理署2014年度研究成果报告。

厦门WTO工作站编

2015.9.24