众所周知，药物的鉴别试验在药物研发、药物检测中有着不可小觑的重要地位。只有在药物鉴别无误的情况下，进行药物的杂质检查、含量测定等分析才有意义。

药物的鉴别试验是根据药物的分子结构、理化性质，采用物理、化学或生物学方法来判断药物的真伪。鉴别项下规定的试验方法，仅适用于鉴别药物的真伪；对于原料药，还应结合性状项下的外观和物理常数进行确认。

一、性状反映药物特有的物理性质

1.外观：是对指药品的色泽和外表感观的规定，包括药品的聚集状态、晶型、色泽以及臭、味等性质。

2.溶解度：在一定程度上反映了药品的纯度、晶型或粒度，也可供精制或制备溶液时参考。药品的溶解度不合格，提示其纯度、晶型或粒度可能存在问题。一个化合物的表观溶解度是由其组成的各个成分溶解度的加权和。尽管其含量测定可能合格，但溶解度的不合格提示了其中的一个或几个比较大的相关杂质影响其表观溶解行为。另外，溶解度不合格，也可能是由药品的晶型或粒度的差异造成的。

例如：小编得知某企业在做罗红霉素胶囊工艺处方研究试验时发现，不同厂家生产的罗红霉素原料，对罗红霉素胶囊制剂溶出度影响不同，后经过试验证实：原料药粒度不同是溶出度结果存在差异的主要原因。

3.物理常数：是评价药品质量的主要指标之一，如相对密度、馏程、熔点、凝点、比旋度、折光率、黏度、吸收系数、碘值、皂化值、酸值等。

二、一般鉴别试验

1.包括：有机氟化物、有机酸盐、芳香第一胺类、托烷生物碱类、无机金属盐（钠盐、钾盐、钙盐、钡盐的焰色反应、铵盐）、无机酸根（氯化物、硫酸盐、硝酸盐）。

其中，有机氟化物：取供试品约7mg，照氧瓶燃烧法进行有机破坏，用水20ml与0.01mol/L氢氧化钠溶液6.5ml为吸收液，使燃烧完全后，充分振摇，取吸收液2ml，加茜素氟蓝试液0.5ml。再加12%醋酸钠的稀醋酸溶液0.2ml。用水稀释至4ml，加硝酸亚铈试液0.5ml，即显蓝紫色，同时作空白对照试验。

有机酸盐：水杨酸盐，取供试品的稀溶液，加三氯化铁试液1滴，即显紫色。

酒石酸盐，取供试品的中性溶液，置洁净的试管中，加氨制硝酸银试液数滴，置水浴中加热，银即游离并附在试管的内壁成银镜。

三、专属鉴别试验

药物的专属鉴别试验是证实某一种药物的依据，它是根据每一种药物化学结构的差异及其所引起的物理化学特性不同，选用某些特有的灵敏的定性反应，来鉴别药物的真伪。

四、鉴别方法

1.化学鉴别法

具有反应迅速、现象明显的特点才有实用价值，至于反应是否完全则不是主要的。

1.1呈色反应鉴别法：供试品溶液中加入适当的试剂，在一定条件下进行反应，生成易于观测的有色产物。

1.2沉淀生成反应鉴别法：供试品溶液中加入适当的试剂溶液，在一定条件下进行反应，生成不用颜色的沉淀，有的具有特殊的沉淀形状。

1.3荧光反应鉴别：在适当的溶剂中药物本身可在可见光下发射荧光，如硫酸奎宁的稀硫酸溶液显蓝色荧光。

1.4气体生成反应鉴别法：大多数的胺类药物、酰脲类药物以及某些酰胺类药物可经强碱处理后加热产生氨气；含碘有机药物经直火加热可生成紫色碘蒸气（碘甘）等。

1.5使试剂褪色的鉴别法：如维生素C的二氯靛酚反应；氧烯洛尔的高锰酸钾反应等。

1.6测定生成物的熔点：费事费时，应用较少。

2.光谱鉴别法

2.1紫外光谱鉴别法（UV）：多数的有机药物分子中含有能吸收紫外可见光的基团而显特征吸收光谱，可作为鉴别的依据，但因吸收光谱较为简单，曲线形状变化不大，用作鉴别的专属性远不如红外光谱。

2.2红外光谱鉴别法(IR)：专属性很强、应用广泛的鉴别方法。主要用于组分单一、结构明确的原料药，特别适合于用其他方法不易区分的同类药物，如磺胺类、甾体激素类和半合成抗生素类药品。

2.3近红外光谱法(NIR)：通过测定被测物质在近红外光谱区750-2500mm

的特征光谱并利用适宜的化学计量学方法提取相关信息后，对被测物质进行定性、定量分析的一种分析技术。

2.4原子吸收法：利用原子蒸气可以吸收由该元素作为阴极灯的空心阴极灯发出的特征谱线的特性，根据供试溶液在特征谱线处的最大吸收和特征谱线的强度减弱程度可以进行定性、定量分析。

2.5核磁共振法(NMR)：利用原子核的物理性质，采用当代先进的电子和计算机技术，用于各种分子物理和化学结构的研究。

2.6质谱鉴别法(MS)：将被测物质离子化后，在高真空状态下按离子的质荷比大小分离，而实现物质成分和结构分析的方法。

3.色谱鉴别法

利用不同物质在不同色谱条件下，产生各自的特征色谱行为进行的鉴别试验。采用与对照品在相同条件下进行色谱分离，并进行比较，根据两者保留行为和检测结果是否一致来验证药品的真伪。此方法操作比价费时。

3.1薄层色谱鉴别法（TLC）：

在ChP2015中，对薄层色谱鉴别法在斑点的颜色、位置与斑点大小方面做出了明确要求：①供试品溶液和对照标准溶液，在同一报层板上点样、展开与检视，供试品色谱图中所显斑点的位置和颜色（或荧光）应与标准物质色谱图的斑点一致；

②必要时化学药品可采用供试品溶液与对照标准溶液混合点样、展开，与标准物质相应斑点应为单一、紧密斑点；

③选用与供试品化学结构相似药物对照品或杂质对照品，两者的比移值（R_f）应不同（如泼尼松龙与氢化可的松）；上述两种溶液等体积混合，应显两个清晰分离的斑点。

注意事项：由于受到薄层板质量、边缘效应等因素的影响，实际操作中有时会遇到同一物质在同一块薄层板上的R_f值不一的情况，操作中可增加将供试品溶液与对照品溶液等量混合，点样后出现单一斑点作为鉴别依据。

3.2高效液相色谱和气相色谱鉴别法

一般规定按供试品含量测定项下的色谱条件进行试验。要求供试品和对照品色谱峰的保留时间应一致；例如，维生素E的GC鉴别和复方磺胺甲恶唑片中两主成分的HPLC鉴别。含量测定方法为内标法时，也可要求供试品溶液和对照品溶液色谱图中药物峰的保留时间与内标物峰的保留时间比值应相一致。

采用HPLC和GC鉴别法时应注意，色谱系统的稳定性要好，同一物质不同时间进样的保留时间重现性必须有保证。在实际操作中，由于条件不明原因的微小变化，有时候存在同一物质在表面完全相同的色谱系统中保留时间不一致的情况，尤其梯度洗脱时此种现象更为常见。

3.3 显微鉴别法

显微鉴别主要用于中药及其制剂的鉴别，通常采用显微镜对药材的切片、粉末、解离组织或表面制片，以及含饮片粉末的制剂中饮片的组织、细胞或内含物等特征进行鉴别的一种方法。鉴别时选择有代表性的供试品，根据各品种鉴别项的规定制片。制剂根据不同剂型适当处理后制片。

例如，何首乌的横切面、粉末显微鉴别图像如下。

3.4 生物学法

利用药效学和分子生物学等有关技术来鉴定药物品质的一种方法，主要用于抗生素、生化药物以及中药的鉴别，通常分为生物效应鉴别法和基因鉴别法两大类。按照鉴定的目的和对象不同，也可分为免疫鉴别法、细胞生物学鉴别法、生物效价测定法、纯指标测定法、DNA遗传标记鉴别法、mRNA差异显示鉴别法等。

3.5 指纹图谱与特征图谱鉴别法

中药指纹图谱建立的目的是通过对所得到的能够体现中药整体特性的图谱识别，提供一种能够比较全面地控制中药质量的方法，从化学物质基础的角度保证中药制剂的稳定和可靠。其具体时间是采用指纹图谱模式，将中药内在物质特性转化为常规数据信息，用于中药鉴别和质量评价。

例如，刺五加浸膏特征图谱如下：

五、鉴别试验的条件及方法验证

    鉴别试验的目的是判断药物的真伪，它以所采用的化学反应或物理特性产生的明显的易于觉察的特征变化为依据，因此，鉴别试验必须在规定条件下完成，否则将会影响结果的判断。影响鉴别反应的因素主要有被测物浓度、试剂的用量、溶液的温度、pH、反应时间和干扰物质等。

5.1 溶液的浓度：在鉴别试验中加入的各种试剂一般是过量的，溶液的浓度主要是指被鉴别药物的浓度。鉴别试验多采用观察沉淀、颜色或测定各种光学参数的变化来判定结果，药物的浓度直接影响上述参数的变化，必须严格规定。

5.2溶液的温度：温度对化学反应的影响很大，一般温度每升高10℃，可使反应速度增加2-4倍。但温度升高使得化合物分解，导致颜色变浅，甚至观察不到阳性结果。

5.3溶液的酸碱度：许多鉴别试验反应都是需要在一定酸碱度的条件下才能进行。

5.4试验时间：有机化合物的化学反应和无机化合物不同，一般反应速度较慢，达到预期试验结果需要较长时间。是因为有机化合物是以共价键相结合，化学反应能否进行，依赖于共价键的断裂和新键形成的难易，这些价键的更替需要一定的反应时间和条件。

5.5鉴别方法的验证：因为鉴别的目的是判定被分析物是目标化合物，而非其他物质，因此用于鉴别的分析方法要求具有较强的专属性。鉴别试验一般需要对方法的专属性和耐用性进行验证。

5.5.1专属性：是指其他成分存在的情况下，采用鉴别方法能否正确地鉴别出被测物质的特性。

5.5.2耐用性：在测定条件发生小的变动时，测定结果受到的影响程度。如色谱柱型号、pH值等。

    鉴别试验是药品质量检测工作中的首项任务，适用于未知化合物的鉴别或目标对象的结构确认。