您当前的位置：检测资讯 > 法规标准
嘉峪检测网 2019-06-10 15:10
在利用大肠杆菌表达重组蛋白时，一般需要对重组菌进行质粒保有率（有些说法是质粒丢失率）的测定，验证质粒的遗传稳定性，一般要求是质粒保有率不低于90%（不同情况下要求不同）。
检测原理：在培养基上加入相应的抗生素，然后利用重组菌质粒上带有的抗性基因，筛选出带质粒的大肠杆菌。
实验方法
1、稀释菌液至稀释倍数为10-6、10-7、10-8,，分别将菌液涂布到LB固体培养基上，培养17小时，37℃。
2、选择菌落数在30-300个范围的培养皿，挑选100个生长良好的菌落，分别接种到含抗生素的LB固体培养基和不含抗生素的LB培养基上，培养12小时，37℃。
3、计下各培养基上菌落数。
4、计算公式：质粒保有率=含抗生素培养基上菌落数/不含抗生物培养基上菌落数*100%
5、质粒丢失率=（不含抗生素培养基上菌落数-含抗生素培养基上菌落数）/不含抗生素培养基上菌落数*100%
来源：Internet
