01液相色谱柱

 

关于色谱柱的安装、维护、保存以及由色谱柱导致的这样那样的色谱故障也是一门学问。

 

高效液相色谱柱的正确使用包含：加装保护柱，过滤流动相和样品，净化样品，避免过高的柱压，注意温度和酸碱度，正确及时的冲洗等。

 

关于液相色谱柱的使用注意事项，一般有以下6个要点： 

 

1.加装保护柱

 

保护柱的作用是过滤掉来自流动相和样品的化学“拉圾”同时也可以有效除去流动相和样品中的不溶物。尽管现在的色谱仪在流动相吸入口、进样阀后部以及在色谱柱的两端都装有1、2μm等不同孔径的滤器,但滤器只能除去不溶性颗粒而不能除去化学污染,因此,加装保护柱是必要的,特别是在分析中药、中成药等复杂混合物和生物样品时更是保护分析柱必不可少的措施。

 

保护柱填料应与分析柱一致,粒径可较分析柱大。保护柱属消耗品,经过一定次数的样品分析(50～100次)后,出现柱压显著升高或峰形变坏或基线漂移时,应考虑更换保护柱。

 

2.过滤流动相和样品

 

流动相通常由水或缓冲溶液与有机溶剂混合而成,原则上,所有经过色谱柱的流动相均应过滤,但在实际操作上应视具体情况而有所区别:当有机溶剂用色谱纯级,水用石英亚沸水或其它超纯水时,在能确保水和有机溶剂的质量且没有受到污染时,过滤并无更多实际意义。

 

当流动相中含有缓冲盐时,则过滤是必要的,如前所述,当缓冲溶液放置一段时间(视环境温度不同而异,夏季一般不超过48 h,冬季一般不超过一周)后,在使用前还应重新过滤。

 

所配制的样品试液在注入流路系统前均要经0. 45μm ( 0. 22μm则更好)孔径滤膜过滤。要注意区分水系和油系,二者不可混用,以防止滤膜溶解而造成污染。

 

装流动相的容器和色谱系统中的在线滤器要定期清洗和更换,以避免滤器因过载而起不到过滤作用。

 

3.净化样品

 

当样品中含有对色谱柱有损害的化学成分,如产生永久性吸附的蛋白质、糖等有机分子和强吸附性物质,以及可能对柱填料产生破坏作用的基团离子。在进样前应尽可能对样品进行分离提纯以除去多余杂质组分。

 

4.避免过高柱压

 

虽然高效液相色谱柱能耐受的压力可达6000 p si (磅/平方英寸) ,但过高及过大的压力变化均会缩短色谱柱的寿命,避免的方法是

 

(1)柱压过高时,尽可能采用较小的流速,以不超过柱最大允许压力的一半为宜。

 

(2)当流速较大时,应采取流速梯度的办法使流速分步到位。

 

(3)使用手动进样阀时,进样阀的切换要尽可能的快。否则超过20%的压力冲击会很快使柱报废。当使用多柱联用时,柱切换要避免在高压下进行。

 

5.注意温度和酸碱度

 

一般以硅胶为基质的色谱柱最高使用温度不超过60℃,以低于40℃为宜,特别是在流动相pH接近使用限度时,更应降低使用温度。

 

温度过高会加快键合相的水解和硅胶的溶解,从而使填料性质改变,柱床塌陷,降低柱效,改变峰形。

 

目前的键合硅胶色谱柱标示的pH适用范围可达2～10,但在实际使用时应避免极端的pH条件,特别是在偏碱性的条件(pH≥8)下使用 ,如必须要在极端的pH条件下使用时,可通过以下方法避免柱损害:

 

(1)在泵和进样阀之间加装预柱(饱和柱)来饱和流动相

 

(2)降低使用温度

 

(3)检验完毕后立即用与所使用的流动相互相混溶的“温和溶剂”彻底清洗。

 

6.正确及时的冲洗

 

开始试验前,应了解柱中当前是何种溶剂。对于新色谱柱,如无特殊说明均为评价报告中所用流动相。柱中当前溶剂一定要与分析样品所用流动相互溶,如不能混溶,要用与二者均能相互混溶的第三种溶剂过渡。

 

02气相色谱柱

 

为了避免柱后被冲开和柱内担体塌陷,通气时缓慢升至所需柱前压。为避免检测器被污染,老化时请不要将色谱柱和检测器相连。当柱箱温度高于室温时, 载气中少量氧会损坏色谱柱内的固定相, 载气必须采用脱氧管进一步脱氧(建议所用载气中氧气含量不要超过1ppm) 。

 

安装色谱柱时, 产品牌号应面向操作者, 左侧为色谱柱的进样口。拆卸色谱柱时, 应先将柱温降至室温, 然后再关载气 。

 

使用毛细管色谱柱时的注意事项

 

毛细管色谱柱在气相色谱仪分析中是一个核心部分,正确使用毛细管色谱柱对气相色谱仪分析结果的准确性和延长毛细管色谱柱的使用寿命至关重要:载气必须采用脱氧管进行进一步脱氧 (建议所用载气中氧气含量不要超过PPM) ;拆卸色谱柱时先要将柱温降至室温,然后再关载气;

 

安装完色谱柱后, 要先通载气将柱内的空气置换干净后再升柱温;仪器载气管路使用金属管,使用前一定要进行检漏;请在不做分析时将柱温降到100度以下,可延长色谱柱使用寿命;

 

03SPE固相萃取小柱

 

SPE固相萃取柱适合不同体积样品处理，SPE小柱也可根据客户的需求加工定制。自产的SPE小柱回收率高、流速适中、吸附量大、重现性好、性价比高、比国内同类产品有更高的重复性和一致性。在环境水体污染物的萃取、生命科学、食品农残和兽残以及动植物提取等方面可以达到的效果。

 

SPE固相萃取柱的容量是指固相萃取柱填料的吸附量。对于以硅胶为基质的固相萃取柱，其容量一般在1~5 mg/100 mg，也就是柱容量是填料质量的1%~5%。而键合硅胶离子交换吸附剂填料的容量以meq/g表示，即每克填料的容量为X毫克当量。这类填料的容量通常在0.5~1.5 meq/g。

 

SPE固相萃取柱为样品分析前的储备提供快速和有效的纯化和浓缩，为使这些产品获得zui佳的分析结果需要注意以下四个方面：

 

1、样品的物理和化学特征：影响因素如被分析物相对与介质的极性，带电荷的官能团，溶解性，分子量，等等，决定了被分析物与填充床的结合强度。

 

2、选择适当的保留方法：可能的方法有两种：*，被分析物不保留与填充床，而干扰物保留，如此纯化了样品。第二，被分析物保留与填充床，而干扰物不保留，或者在样品洗脱前先从填充床上洗脱。当样品需要浓缩时，常用的方法为第二种方法。

 

3、选择适当的填充料和填充床大小：不同的填料类型提供不同的选择性。填料类型应zui大的利用被分析物和样品中的干扰物的结构差异。选择有适当选择性的填料能获得zui高的回收率和zui高纯度的样品和提取物。当填充床的大小未经优化时，通常有回收率低的问题。填充床太大时会导致洗脱不完全，而填充床太小时会导致保留不完全，两种情况都是回收率比预期的低。

 

4、选择合适的调节，冲洗和洗脱溶剂：必须注意各类溶剂相对于填料的洗脱强度上样的样品调节溶剂应是没有洗脱作用的“弱溶剂”，必须使用缓冲也来控制潜在的带电荷化合物的离子化程度。冲洗溶剂应将弱保留的干扰物洗脱，但是洗脱强度不应太强而导致被分析物洗脱。洗脱溶剂的强度应足够使被分析物在较小的体积下（1-2ml）完全洗脱。

 

化合物在溶剂中的溶解性是一个重要的参数。一种溶剂如果不溶解被分析物而溶解样品中的干扰物，那么它是一种的冲洗溶剂，但是不能作为洗脱溶剂。

 

SPE固相萃取柱产品用途：用于样品的预处理，通过样品的分离，纯化和浓缩，提高样品进行的液化、气象分析的速度，去除杂志，延长色谱设备的使用寿命，避免色谱系统的污染。

 

04液体自动进样器样品瓶

 

1、样品瓶盖要盖紧，如果太松的话，进样针穿不透样品瓶的瓶垫而把其插入瓶内，会导致取样失败；

 

2、样品瓶不要装得过满，一般来说瓶内液面应保持在瓶内三分之二高度以下。如果液面过高，进样体积又比较大时，密封的样品瓶内易产生负压，影响进样针准确的抽取液体，甚至在针内产生气泡，从而导致进样重复性不好；

 

3、样品宝贵或样品量有限时，可使用样品瓶内插管或高回收率样品瓶，也可调节取样时样品针尖的位置，以大限度的利用有限的样品；

 

4、针尖的位置下到离瓶底只有0.5mm时，要注意使用规格标准的样品瓶，避免针尖戳到瓶底，损坏进样针；

 

5、选用规格标准的样品瓶，避免取样出错或失败，甚至损伤进样针。

 

05针头过滤器

　

1、新的针头过滤器必须用清洁剂清洗干净洗净后用高温蒸汽杀菌、消毒、洗净的滤器要放好，避免污染。

 

2、针头过滤器使用前必须检查配件和密封圈是否齐全，有无损坏，然后按要求把它装好。

 

3、筒体的压力表是液体压力显示表，如果是二级过滤，针头过滤器压力表指数稍少一些是正常现象，使用时间越长，他们的压力会增大，流速减少，这说明滤芯空隙大多已被堵塞，要冲洗或者更换新的过滤芯。

 

4、针头过滤器的安装时进出口不要接反，管道滤器底板边上的口是液体进口处，管道接在滤芯插口的管子是干净液体出口处。

 

5、滤芯插入口时，滤芯一定要垂直，插入口后压板扣住翅片，扭紧螺丝不动即可。226接口的滤芯入口后，应旋转90度卡紧，这是安装中的关键，如果有一点不小心，就会达不到密封，容易漏水，就达不到你的使用要求。

 

6、新的滤芯是生产厂家在洁净的生产厂房内用塑料袋封装的未使用切勿撕破塑料包装，使用要求较高的滤芯，安装好后要经过高温蒸汽杀菌消毒。

 

7、需要过滤的液体进入时，应打开针头过滤器上面的放气开关，让液体充满柱体，否则过滤效果不好。

 

06离心管

 

一、高速冷冻离心机

 

1.  未经过培训和考核者不能使用。

2.  选择合适的转头和转速，绝不可*速使用。

3.  选择合适的温度，通常4℃，除有机溶剂外不要低于零下，以免冰冻，损坏离心管和转头。

4.  转头使用前必须用擦孔棒将管空擦净，并仔细检查有无裂痕和孔底白斑。若有，转头报废。

5.  离心管内装载的溶液量必须合适。不锈钢管无盖，只能装2/3，塑料管可装至肩部。管盖必须盖严绝不允许漏液。空管离心会变形。塑料管使用有机溶剂必须符合规定。

6.  离心管必须成对放置，必须严格平衡，偏差<0.1g 。

7.  不允许无转头空转，放取转头必须用手柄以防转头滑落。转头要轻放、卡稳，旋下手柄时要用手扶住手柄只转转头。转头盖要盖严，无盖不准离心。

8.  离心时不准打开机盖，不准扒扶在离心机上，如有异常声音和振动时立即停机。

9.  转头使用后必须及时由转头舱中取出、擦干，用擦孔棒将管孔仔细擦净。如有溶液溢出必须清洗干净，擦净转头舱内凝水，开门晾干转头舱。

10. 使用离心机必须预约，用后必须登记。

 

二、普通离心机

1. 离心前必须仔细检查转头各孔内有无异物。

2. 离心管必须仔细平衡。

3. 机舱内若不清洁，离心管要用塑料薄膜封口。

4. 必须慢启动，然后加速。

5. 离心时不准开盖。

 

07滴定管

 

1、滴定管使用前必须试漏。方法是：滴定管活栓不涂油脂，注水至全容量，垂直静置15min，所渗漏的水不超过最小分度值，即可使用。

 

2、向滴定管注入标准液时，应先用少量标准液把滴定管润洗2～3次。注入标准液至“0”刻度以上几厘米，如是酸式滴定管，转动活栓使溶液急速充满尖嘴，并不得存有气泡；如是碱式滴定管，将乳胶管向上弯曲，挤捏管内玻璃球，使溶液充满胶管和玻璃尖嘴。调整滴定管内液，使其处于“0”刻度。

 

3、读数时，滴定管必须保持垂直。装好或放出溶液后，应静置片刻，待附着在内壁上的溶液流下之后再读数。读数者的视线必须与管内液面的最凹点处于同一水平线上。标准溶液如是深色（如KMnO4溶液），读数时可以凹液面两侧最高处与视线处于同一水平线为准。最小分度如是0.1mL读数时应估读至0.01mL。

 

4、滴定管用毕暂时不再使用时，应洗净并擦净活栓，在活栓处应垫一纸条，以防粘连。

 

08冻存管

 

1、使用冻存管储存样本时，严格要求应把冻存管放入液氮的气相层或冰箱中保存！如果冻存管储存于液氮液体中，液氮有一定几率会渗入冻存管内部，复苏时液氮气化导致管内外压力不平衡，这样极易造成冻存管的炸裂，并具有生物危害性。

 

2、操作冻存管复苏，全程使用安全防护设备，建议穿实验服、戴棉质手套且在安全的实验台上进行操作。条件允许情况下，请佩戴护目镜或防护面罩。由于夏季室内温度会高于冬季，请格外小心。

 

3、冻存细胞储存过程中，冻存管的冷冻温度须均匀。不均匀的受冻将会导致冰塞的产生，冰塞会抑制两侧的液体温度传递进而产生危险的高压力并导致冻存管受损。

 

4、冻存的样本量不要超过冻存管要求的最大工作体积。

 

09比色皿

 

1．拿取比色皿时，只能用手指接触两侧的毛玻璃，避免接触光学面，用力不可过大。

 

2．不得将光学面与硬物或脏物接触。盛装溶液时，高度为比色皿的2/3处即可，光学面如有残液可先用滤纸轻轻吸附，然后再用镜头纸或丝绸顺着同一方向擦拭。

 

3．凡含有腐蚀玻璃的物质的溶液，不得长期盛放在比色皿中。

 

4．比色皿在使用后，应立即用水冲洗干净。必要时可用1：1的盐酸浸泡，然后用水冲洗干净。

 

5．不能将比色皿放在火焰或电炉上进行加热或干燥箱内烘烤；

 

6．在测量时如对比色皿有怀疑，可自行检测。可将波长选择在实际使用的波长上，将一套比色皿都注入蒸馏水，将其中一只的透射比调至95%（数显仪器调置100%）处，测量其它各只的透射比，凡透射比之差不大于0.5%即可配套使用。

 

7、比色皿换向后误差可达4％一7％左右。所以在准确测量时；定要看准比色皿箭头标志。如无标志，可作配套检定后按方向在毛玻璃上端作上箭头一致的标记。以避免操作时搞反。

 

8、比色皿使用时请勿碰撞。

 

10定性滤纸

 

定性滤纸是一种具有良好过滤性能的纸，定性滤纸纸质疏松，对液体有强烈的吸收性能。分析实验室常用滤纸作为过滤介质，使溶液与固体分离。

 

由于定性滤纸的特性，从而实验室和医院，工厂等各行各业的一些过滤都会用到定性滤纸，也是因为这样才让定性滤纸产量直线上升。

 

定性滤纸在过滤的过程中应该注意的事项,一般情况下,定性滤纸使用都不会在高温下进行过滤的,这个温度有一个限度只要不超过就行了,别外不要过滤热的浓硫酸或硝酸溶液热的酸性可以破坏定性滤纸的过滤效果.

 

一般采用自然过滤，利用滤纸体和截留固体微粒的能力，使液体和固体分离；

 

定性滤纸在过滤机器中的使用,滤纸的机械强度和韧性都较尽量少用抽滤的办法过滤，如必须加快过滤速度，为防止穿滤而导致过滤失败，在气泵过滤时，可根据抽力大小在漏斗中叠放2～3层滤纸，在用真空抽滤时，在漏斗上先垫一层致密滤布，再放滤纸过滤。