1、温度误差因素
旋光仪长时间工作温升较高，样品与旋光仪温度平衡需一定时间，由于测试方法上的原因，时间长样品会逐渐浑浊，影响光线透过率，同批次样品较多时易造成测量误差。当样品温度偏离规定的20℃±0.2℃时，应进行修正。
另外，温度变化还会使待测物质分子间发生缔合或离解，使旋光度发生改变。不同物质的温度系数不同，一般在-(0.01～0.04)℃之间。为此在实验测定时必须恒温，旋光管上装有恒温夹套，与超级恒温槽连接。
旋光仪工作时，环境温度应保持在20℃左右，并置于易通风散热、阴凉干燥弱光处。温升过高、各部分元部件参数会发生变化，影响测量准确度。测量间隔时间超过半小时以上的时应关闭电源以减小自身发热量，测量样品温度时应规范、及时和准确，避免人为因素。
2、浓度和旋光管误差因素
在一定的实验条件下，常将旋光物质的旋光度与浓度视为成正比，将比旋光度作为常数。而旋光度和溶液浓度之间并不是严格地呈线性关系，因此严格讲比旋光度并非常数，旋光度与旋光管的长度成正比。旋光管通常有10cm、20cm、22cm三种规格。旋光仪经常使用的有10cm长度的。但对旋光能力较弱或者较稀的溶液，为提高准确度，降低读数的相对误差，需用20cm或22cm长度的旋光管。
旋光管长度误差对测量结果有较大影响，应符合0.01～0.2%标称尺寸准确度要求，两端要保持干净、无裂纹、缺口、划痕，定期清洗和检定，旋光仪测量前应在经检定合格准备使用的旋光管中注入蒸馏水或空白溶剂进行零位校正，旋光管端帽磨损过大时要及时更换，避免因旋光管中心线与光路轴线不重合产生较大误差。
3、溶剂误差因素
旋光物质的旋光度主要取决于物质本身的结构。另外，还与光线透过物质的厚度，旋光仪测量时所用光的波长和温度有关。如果被测物质是溶液，影响因素还包括物质的浓度，溶剂也有一定的影响。因此旋光物质的旋光度，在不同的条件下，测定结果通常不一样。
4、人员因素误差
操作人员的不规范行为：①不测量样品温度;②测量时温度平衡时间不足;③不按检测方法规定的读取五次测量要求平均值;④测量结束后不读取旋光仪零点;⑤不等旋光仪*平衡后匆忙读数;⑥在旋光仪起辉状态下测量等等。
5、旋光仪计量性能变化因素误差
旋光仪长时间工作后光、机、电各部分工作状态的变化引起计量性能的变化，较明显的有几种表现：
①旋光仪示数偏低：220V交流供电偏低，超出机内稳压电源范围，钠光灯发暗。钠光灯超寿命使用而老化发光不足。滤光片脏污、移位，主光路不正，均会造成光通量减小。光电倍增管衰老灵敏度下降，电子元部件性能变化使输出减弱等，都会造成读数误差。
②旋光仪示数偏高：滤光片移位或脱落损坏，钠光灯供电电流偏大、电压偏高，使测量产生负误差。钠光灯超常发光还会降低使用寿命。
③旋光仪示数变差大，重复性差：机械部分配合失当，紧固件有松动或位移，石英调制片或调制电机相互间有滑动。数字式旋光仪光电计数机构工作不协调，两只光电管性能差异过大，透度狭缝位置欠佳等等。
