一、肿瘤细胞的准备

1、细胞株选择

选择适合的肿瘤细胞株，如乳腺癌细胞、肺癌细胞或结直肠癌细胞等，确保这些细胞株在小鼠模型中已被验证能够成瘤。

2、细胞的活力和状态

确保接种的肿瘤细胞具有高活力和良好的生长状态。在接种前，通过细胞计数、台盼蓝染色等方法评估细胞的存活率，一般来说，存活率应在90%以上。如果细胞存活率较低，可能会导致接种后成瘤效率降低甚至不成瘤。

3、细胞的浓度

选择合适的细胞浓度进行接种。通常，每只小鼠的接种量在1×10⁶至1×10⁷个细胞之间，但具体浓度可能因肿瘤细胞类型和实验目的而异。某些恶性程度较高的肿瘤细胞可能在较低浓度下就能成瘤，而一些生长较为缓慢的细胞可能需要更高的浓度，如某些低度恶性的甲状腺肿瘤细胞、部分前列腺癌的肿瘤细胞等。

4、细胞的培养条件

维持肿瘤细胞在适宜的培养条件下生长，包括培养基的成分、温度、CO₂浓度等。

二、小鼠的选择和准备

1、品系

不同品系的小鼠对肿瘤细胞的敏感性可能不同。常用的小鼠品系如BALB/c、C57BL/6等，根据肿瘤细胞株的特点选择免疫缺陷或免疫健全的小鼠品系。如BALB/c 小鼠在乳腺癌模型中可能更容易成瘤。

2、年龄和性别

一般选择6-8周龄的小鼠，雌性或雄性均可，但要保持实验中性别和年龄的一致性。

老年小鼠的免疫系统可能相对较弱，对肿瘤细胞的抵抗力也会有所不同。

3、免疫状态

如果需要研究免疫相关的肿瘤发生机制，可以选择免疫健全的小鼠；如果要排除免疫系统的影响，可以使用免疫缺陷小鼠，如裸鼠或NOD/SCID小鼠。

4、小鼠的健康状况

确保小鼠健康，无感染和其他疾病，以免影响肿瘤细胞的接种和生长。

5、小鼠环境准备

在接种前将小鼠适应实验环境，确保环境温度、湿度和光照等条件适宜。

三、接种方法

1、皮下接种

这是最常见的接种方法之一，操作简单且肿瘤易于测量。在小鼠的侧腹或背部皮下注射肿瘤细胞悬液，注射时要注意避免注入血管。

方法：先固定小鼠，右手持注射器，使针头与小鼠皮肤呈约45度角刺入皮下，当针头进入皮下后，会感到阻力减小，此时轻轻推动注射器活塞，将肿瘤细胞悬液缓慢注入皮下，一般注射量为0.1-0.2mL左右，具体根据实验要求调整，注射完毕后，轻轻拔出针头，用酒精棉球再次擦拭注射部位，防止感染。

2、原位接种

根据肿瘤的类型，选择相应的器官进行原位接种，如肺癌细胞可以接种到肺，乳腺癌细胞可以接种到乳腺。这种方法更能模拟肿瘤在体内的自然生长环境，但操作难度相对较高。

3、尾静脉注射

用于建立转移模型，将肿瘤细胞注射至小鼠尾静脉，观察肿瘤细胞的血液传播和转移。

四、接种后的护理和观察

1、观察小鼠的健康状况

每天观察小鼠的饮食、饮水、活动情况、体重变化等，及时发现异常。

2、测量肿瘤大小

定期使用游标卡尺测量皮下肿瘤的长径和短径，计算肿瘤体积。 

如图为不同处理组皮下成瘤实验结果图。

五、注意事项

1、必要时可对小鼠进行麻醉，以减少痛苦和应激反应。常用异氟烷或戊巴比妥钠麻醉。

2、细胞注射：使用无菌注射器和细针头（如26G或27G），将肿瘤细胞悬液缓慢注射至预定部位。皮下接种时，注射时注意避免过深或过浅，以确保细胞位于皮下组织中。

3、确保所有操作都在无菌条件下进行，减少细菌感染的风险。接种时肿瘤细胞的状态直接影响成瘤效率，细胞应处于活跃增殖期。小鼠的个体差异可能会影响实验结果，尽可能保证实验的同质性。

总之，要高效地给小鼠接种肿瘤细胞成瘤，需要综合考虑肿瘤细胞的质量、小鼠的选择和接种方法等多个因素，并在实验过程中进行精心的护理和观察。