什么是无菌技术

无菌技术是良好细胞培养规范（GCCP）的一个重要环节，所谓无菌技术，就是建立一个严格的操作规范，并确保所有人都遵照执行，以此来实现建立一个屏障，把有微生物的外部环境和无污染干净的培养物隔开。

其关键点在于：

1 要做到所有与培养物直接接触的物品都是无菌的

2 培养物和外部有微生物的环境不能有直接联系。

其实，说白了就是实验室内微生物无处不在，空气中、任何设备的表面、操作者本身都是有大量微生物的，如果不做任何准备，直接打开培养皿的盖子，微生物就肯定飘进去了。

所以，在你做任何操作之前，都先问自己一句：我是不是已经做好了准备，把培养瓶、培养皿周围上上下下的空间做到无菌了。没有做到或不确定，就别动，想好了准备好了再开盖操作。

无菌技术的要点

那如何才能做到无菌呢？答案是要有标准化操作。我将从以下2方面详细讲解。

1、 首先，是操作者个人卫生

进入细胞房，要穿专用的实验服、戴好口罩和手套。专用的实验服，是指这件实验服只在细胞房内使用，不会再用于其他实验室。如果是在GMP规定的环境下工作，则还要穿戴有帽子的长外衣实验服，并配套面罩。但一般来说，我们并不需要做到这个程度。

如果头发较长的操作者，需要把头发扎在脑后。手套的选择应该为外科手套，穿戴时应该让手套开口处与实验服的袖口重叠套在一起，手套在外，袖口在内。每隔一段时间，就应该对手套进行擦拭消毒，手只要离开了生物安全柜，重新伸入安全柜之前要消毒。如果在操作之前不确定手部是否安全，可以先消毒后再操作。

当离开细胞房后，手套必须脱掉扔弃，重新回到细胞房前必须更换新的手套，绝对不可以反复使用手套。如操作过程中，手套出现破裂，应马上离开操作台面，扔弃手套，并彻底清洗消毒手部后，重新再戴上手套才能继续操作。

戴上口罩后是否可以说话？

可以，因为生物安全柜有玻璃屏障，隔开了实验操作者和操作台面，但仍建议大家少说。如果身体不舒服例如感冒了，则最好再戴上面罩或暂时不要去细胞房操作。同样，口罩不能重复使用！

2、 第二方面是生物安全柜内的无菌操作

分为台面布置和台面操作。生物安全柜内的台面是我们的工作区间，务必保持干净整洁，和本次实验无关的物品不要放在台面上，正式实验前，使用含70%-75%乙醇的酒精棉球擦拭台面，并提前打开紫外照射30分钟。

图片来源：https://x.com/GIBCO/status/681976757256237056

如果你是习惯用右手操作的话，建议把试剂瓶、离心管架、吸头等可能会使用左手握取或打开的物品放在台面左侧集中放置，而移液器、记号笔、废液缸等用右手或向右侧操作的物品放右边集中放置。样品的话建议放在中间靠后的位置。 

凡是在生物安全柜内使用的耗材均需要提前灭菌或购买一次性灭菌的规格。因此，习惯左手操作的同学，就可以用相反的规则来指导自己。

开始操作时，人坐中间位置，尽可能让台面的物品和自己保持一定距离，有条件的实验室，应该准备一辆小推车，把实验所需要的物品放在车内靠近操作者的位置。这样一来可以减少操作台面摆放物品的数量，二来减少来回走动取拿物品的次数。

台面上的东西太多是不利于操作的，东西多，就可能离自身太近，就可能会造成误触碰污染却不知道。

凡是从小推车或外面拿进去的物品，都要在生物安全柜外拆掉外包装，然后用酒精棉球擦拭外表面后再放进去。

开始实验之前，可以提前把等会要用到的试剂瓶盖、培养瓶盖拧松但不要拧开，这样可以提高操作效率。

如果要从试剂瓶里吸液出来，应该一手拿移液器，另一只手的尾指和手掌连接处夹住瓶盖拿起瓶盖，然后等液体吸完后，立即盖回盖子。

有同学问，盖子如果实在拿不住或需要另一只手配合做其他事情，盖子怎么办？可以在开盖之前，提前把试剂瓶旁的台面进行酒精棉球擦拭，然后把盖子放在台面上。

图片来源：http://www.cztopeak.com/product/99.html

那么，盖子的口朝上还是朝下呢？我认为都行，但应该是朝下会更安全的。因为手部在台面上操作时，是有可能经过盖子上方的，口朝上的风险应该会比朝下的风险更大。

刚才提到了一点，为什么要如此介意手部越过物品上方的行为呢？

因为我们伸进去操作的手部不是整个都无菌的，可能真正无菌的只有手套的那部分，那么在操作时，手部在台面上的移动，就可能会带来污染物的掉落，如果经过的位置有瓶口、盖子、培养物的话，就可能造成污染。因此，要特别注意。

另外，要确保你的所有操作都必须在自己的视线内。举个例子，移液管是经常要在生物安全柜内用到的一种耗材，它在用之前要安装到电动吸液器或洗耳球上，但移液管特别长，有的同学可能就会习惯性的握住移液管的末端然后套上去电动吸液器或助吸器上，如果此时移液管的尖端是靠近你自己的话，这个尖端就很可能会误触到手部实验服的位置，造成污染。

图片来源：https://toolbox.igus.com/7145/improving-pipetting-reliability-efficiency-with-automation

因此移液管要时刻保持和手臂垂直，这样它的整段都会在你的视线范围内。同理，细胞培养皿、培养板这类敞口特别大的耗材，污染风险是很高的，要对其进行操作的话，能尽量以小的角度打开就尽量小，操作完后尽可能快的盖回去。这也是另一种避免污染的思路。

由于在台面上的操作注意细节很多，我刚才提到的这些只是一些大方向上的原则和标准，真正操作时，还有很多细节要注意。而且，新手操作时也难免会出错，一旦发现出问题，应该立即停止当前的操作，并马上想办法消除污染的风险。

例如，无法确定是否安全的触碰，统一默认为有风险，应扔弃有风险的耗材，例如，液体滴落在台面，应马上停止当前操作，并使用酒精棉球彻底擦拭干净污染台面，例如，不确定手部是不是污染了，统一默认为有风险，先进行消毒再考虑后续操作。