【问】表面微生物监测常见取样方法有哪些？有哪些基本要求？

【答】表面微生物监测可以获得生产区域和设备表面(非产品接触和产品接触)的微生物污染状况，监测人员洁净服和手套表面微生物，用来评估无菌生产工艺的执行情况。常见的方法有:接触碟法、擦拭法、表面淋洗法和柔性薄膜法。

1.接触碟法

接触碟法使用方便并且提供定量的结果。接触碟被灌装充足的培养基以形成一个凸面，并能支持微生物的生长。接触碟在使用前建议放置至室温，从而减少由于冷凝水的原因导致的微生物生长成取样时，将接触碟按压在平面-通过在取样区域上从前0至后轻轻地旋转按压的方式进行，使接触碟的琼脂一边缘先接触被取样表面，再逐渐使整个面接触，避免琼脂和被取样面中间有气泡而降低取样效果。然后将取样碟放置于培养箱中，按照验证过的时间进行培养。在培养结束后对生长的菌落进行计数。

接触碟法适用于规则平面的取样，如地面、墙面、洁净服和手套，取样后必须去除取样点残留的培养基。

2.擦拭法

这个方法可以对不适用于接触碟法的设备和不规则表面进行取样，如有些企业对灌装针使用擦拭法取样。

擦拭法使用的拭子可以由涤纶、尼龙或藻酸钙等物质组成，并且以棉束或纺纱材料的形式进行生产。对每根拭子进行合适的稀释并漩涡混匀，然后进行浇平皿。擦拭法可以提供定性或定量的结果，这取决于在取样后对拭子的处理方法。定性方法如:可以使用一个直接的擦拭方法，将一根润湿的拭子在规定的区域进行取样，取样后直接将拭子放人液体培养基中培养;也可以直接划线于琼脂培养基平板上。定量方法如:用藻酸钙的拭子，将拭子头上的纤维物质溶解，从而释放微生物至溶液中用于浇平皿。

3.表面淋洗法

这个方法推荐使用在对内表面有微生物污染水平要求的大面积的区域。此方法适用反应器、设备、轨道和罐子。通常使用无菌水与内表面进行接触然后对其进行收集和测试。由于样品量较大，通常使用膜过滤法对淋洗水进行测试。

4.柔性薄膜法

该方法使用较少，是使用含有培养基的柔性薄膜，与以接触碟法类似的方式进行取样。这些薄膜也能提供一个规定的取样区域。将培养基薄膜的表面按压在一个平面上，以旋转滚动的方式，从而确保完全接触到柔性薄膜。将薄膜放置在培养箱中按验证过的时间进行培养。在培养结束后对生长的菌落进行计数。如同接触样柔性薄膜会在取样表面上留有培养基残留，也必须去除。

来源:药品GMP指南第2版无菌制剂上册(P520-522)