某化合物极易溶于水，需用制备色谱制备其中的杂质作为对照品。该化合物分析检测方法流动相为四丁基高氯酸铵，C18色谱柱，195nm波长。色谱图如下所示：

目标杂质出峰时间约为3.0min。通过检测方法及出峰时间可知，API及目标杂质极性较大。实验人员尝试采用不加盐或挥发性盐的流动相进行制备，但化合物主峰导严重干扰目标杂质峰，无法进行有效分离制备。

既然简单的挥发性体系无法实现制备，考虑采取其他方案。后续有三个方向可开展：离子交换、Hilic模式及反相加盐。离子交换我们仅有分析柱，上样量太小，而且方法需开发，比较耗时，难以脱盐。Hilic有制备级填料，可用于填装DAC50色谱柱，但需重新开发方法定位杂质，同样比较耗时。反相加盐，直接参照分析方法加入四丁基高氯酸铵。但如何脱盐？目标杂质和四丁基高氯酸铵均有较好的水溶性，难以通过萃取等方式脱盐。二次过柱脱盐时，一般都是以水和乙腈为流动相体系，通过保留目标杂质的形式进行脱盐。但目标杂质在C18填料上不保留该如何脱盐？

过柱脱盐利用目标物与盐类之间保留差异进行脱盐。此目标杂质虽然在C18色谱柱中无保留，然而四丁基高氯酸铵却能良好的在色谱柱上保留。二次上样后，目标杂质在死时间附近流出，四丁基高氯酸铵需要增加流动相才能洗脱下来。按照此方案进行杂质制备，一次制备图谱如下所示：

脱盐利用纯水和乙腈作为流动相，采用C18填料，接取5-10钟之间的色谱峰。高氯酸根在此之前出峰，四丁基铵在此之后出峰。脱盐图谱如下所示：

对脱盐前后样品溶液中的四丁基高氯酸铵残留量利用质谱检测。未脱盐前制备液1.5L，约含2.4g四丁基铵。脱盐后30ml浓缩液目标杂质含量约1.7 g，四丁基铵约3mg，含量约为0.2%。通过此方法，有效的去除了目标杂质中的四丁基铵。当然，高氯酸根的残留量没有检测，理论应该也不会太多

在利用制备色谱制备杂质时，对于极性较大的目标物，如果难以用挥发性组分进行制备必须选择加盐，此时可考虑加入与目标物极性差异较大的盐类。脱盐时通过将盐类保留而目标物不保留的方式进行脱盐。