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嘉峪检测网 2017-09-19 09:29
一、方法原理：
待测样品
待测样品中的苯甲酸、山梨酸和糖精钠均是水溶性的，直接以水作为提取液；对于蛋白含量较高的样品，如肉制品，需要使用蛋白沉淀剂进行除蛋白；对于脂肪含量较高的样品，如固态调味料，需要采用有机溶剂将样品中的脂肪除去。
通常采用亚铁氰化钾和乙酸锌作为蛋白沉淀剂，正己烷作为除脂肪剂。提取中可采用涡旋或超声提取。待测液经过高效液相色谱仪分离，经紫外检测器或二极管阵列检测器检测，通过色谱峰的保留时间和扫描光谱图进行定性，外标法进行定量。
二、试样制备：
对于均匀样品，如牛奶，可直接将多个预包装样品直接混合均匀；对于不均匀样品，如水果罐头，先采用粉碎机或组织匀浆机将其粉碎，再搅拌均匀，对于较为粘稠的样品，如可可制品，可先将其加热使其熔融，在熔融状态下搅拌均匀。
三、试样保存：
液体样品于4 ℃下保存；其他样品于-18 ℃下保存。
四、试样提取：
1、非高蛋白高脂肪样品：称取混合均匀的样品2-5 g（精确至0.001 g），加入20 mL水，涡旋混合30 s，超声提取20 min，取出待冷却至室温定容至25 mL，摇匀，5000 r/min离心10 min，取上清液过0.22 μm滤膜待测。
2、高蛋白样品：称取混合均匀的样品2-5 g（精确至0.001 g），加入15 mL水，涡旋混合30 s，超声提取20 min，取出待冷却至室温加入亚铁氰化钾和乙酸锌溶液各2 mL，涡旋混合， 5000 r/min离心10 min，将上清液转移至另一容量瓶中，并用水定容至25 mL，摇匀并过0.22 μm滤膜待测。
3、高脂肪样品：称取混合均匀的样品2-5 g（精确至0.001 g），加入5 mL正己烷，涡旋混合，5000 r/min离心10 min，除去正己烷相，并将样品表面吸附的正己烷挥干，向样品中加入15 mL水，涡旋混合30 s，超声提取20 min，待冷却至室温，5000 r/min离心10 min，将上清液转移至另一容量瓶中，并用水定容至25 mL，摇匀并过0.22 μm滤膜待测。
4、高蛋白高脂肪样品：称取混合均匀的样品2-5 g（精确至0.001 g），加入5 mL正己烷，涡旋混合，5000 r/min离心10 min，除去正己烷相，并将样品表面吸附的正己烷挥干，向样品中加入15 mL水，涡旋混合30 s，超声提取20 min，待冷却至室温，加入亚铁氰化钾和乙酸锌溶液各2 mL，涡旋混合， 5000 r/min离心10 min，将上清液转移至另一容量瓶中，并用水定容至25 mL，摇匀并过0.22 μm滤膜待测。
注意事项：
对于高蛋白高脂肪的样品，检验检测过程中需根据蛋白和脂肪的含量对蛋白沉淀剂和正己烷的加入量和除杂次数进行调整，如样品含油较高，则可以通过少量多次加入正己烷进行除脂肪，已达到预期目的。
五、检测
1、标准曲线的配制：精密移取适量的苯甲酸、山梨酸和糖精钠标准溶液，用水稀释，配制成线性范围合适的标准曲线。
注意事项：
1）购买标准品时建议直接选择液态的标准溶液，不建议购买固体标准物质，一是省去标准物质称量带来的误差，同时避免标准溶液的浓度出现小数等后期数据处理带来的不便，二是避免有些固态标准物质使用前需要烘干等前处理带来的麻烦；
2）标准曲线的线性范围建议根据待测样品溶液中待测组分的含量而定，尽量使样品溶液中待测组分的含量处于标准曲线的中间位置，以最大限度的降低标准曲线拟合引入的检测结果的不确定度。
2、样品溶液的检测：按照同标准溶液检测的相同仪器条件进行样品溶液的检测。
注意事项：
检测器的选择建议采用二极管阵列检测器，因样品中的苯甲酸、山梨酸和糖精钠的检测波长为230 nm，处于紫外区，易出现干扰峰。
若采用二极管阵列检测器进行检测，同时可以对光谱进行扫描，首先根据保留时间定性后，再通过光谱图进一步定性，以确保对应保留时间的色谱峰确实为待测组分峰，避免发出假阳性报告。
来源：食品580
