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嘉峪检测网 2021-04-02 09:52
液相色谱系统的许多问题都可以在谱图上反映出来。其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决;而其他的问题必须通过修改操作程序来解决。对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键所在。
原因 |
解决办法 |
1.筛板阻塞; |
1.a.反冲色谱柱; b.更换进口筛板; c.更换色谱柱; |
2.色谱柱塌陷; |
2. 填充色谱柱; |
3.干扰峰; |
3. a.使用更长的色谱柱; b.改变流动相或更换色谱柱; |
4.流动相pH选择错误; |
4.调整pH值,对于碱性化合物,低pH值更有利于得到对称峰; |
5.样品与填料表面的溶化点发生反应; |
5.a.加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂。b.更改色谱柱。 |
原因 |
解决办法 |
1.柱温低; |
1.升高柱温; |
2.样品溶剂选择不恰当; |
2.使用流动相作为样品溶剂; |
3.样品过载; |
3.降低样品含量; |
4.色谱柱损坏; |
4.见A1、A2; |
原因 |
解决办法 |
1.保护柱或分析柱污染; |
1.取下保护柱再进行分析;如果必要更换保护柱;如果分析柱阻塞,拆下来清洗;如果问题仍然存在,可能是柱子被强保留物质污染,运用适当的再生措施;如果问题仍然存在,入口可能被阻塞,更换筛板或更换色谱柱。 |
2.样品溶剂不溶于流动相; |
2.改变样品溶剂;如果可能采取流动相作为样品溶剂; |
原因 |
解决办法 |
1.样品过载; |
1.减少样品载量; |
原因 |
解决办法 |
1.样品溶剂选择不恰当; |
1. a.减少进样体积; b.运用低极性样品溶剂; |
原因 |
解决办法 |
1.柱外效应; |
1. a.调整系统连接(使用更短、内径更小的管路); b.使用小体积的流通池; |
原因 |
解决办法 |
1.二级保留效应,反相模式; |
1. a.加入三乙胺(或碱性样品); b.加入乙酸(或酸性样品); c.加入盐或缓冲剂(或离子化样品); d.更换一支柱子; |
2.二级保留效应,正相模式; |
2. a.加入三乙胺(或碱性样品); b.加入乙酸(或酸性样品); c.加入水(或多官能团化合物); d.试用另一种方法; |
3.二级保留效应,离子对; |
3.加入三乙胺(或碱性样品); |
原因 |
解决办法 |
1.缓冲不合适; |
a.使用浓度50~100mM的缓冲液; b.使用P ka等于流动相pH值的缓冲液; |
原因 |
解决办法 |
1.样品中有其他组份; |
1.正常; |
2.前一次进样的洗脱峰; |
2. a.增加运行时间或梯度斜率; b.提高流速; |
3.空位或鬼峰; |
3. a.检查流动相是否纯净; b.使用流动相作为样品溶剂; c.减少进样体积; |
原因 |
解决办法 |
1.温控不当; |
1.调好柱温; |
2.流动相组分变化 |
2.防止变化(蒸发、反应等); |
3.色谱柱没有平衡; |
3.在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱; |
原因 |
解决办法 |
1.流速变化; |
1.重新设定流速; |
2.泵中有气泡; |
2.从泵中除去气泡; |
3.流动相选择不恰当; |
3. a.更换合适的流动相; b.选择合适的混合流动相; |
原因 |
解决办法 |
1.柱温波动;(即使很小的温度变化都会引起基线波动;通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器;) |
1.控制好柱子和流动相的温度,在检测器之前使用热交换器; |
2.流动相不均匀;(流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移) |
2.使用HPLC级的溶剂,高纯度的盐和添加剂;流动相在使用前进行脱气,使用中使用氦气; |
3.流通池被污染或有气体; |
3.用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池;如有需要,可以用1N的硝酸。(不要用盐酸) |
4.检测器出口阻塞;(高压造成流通池窗口破裂,产生噪音基线) |
4.取出阻塞物或更换管子;参考检测器手册更换流通池窗; |
5.流动相配比不当或流速变化; |
5.更改配比或流速;为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速; |
6.柱平衡慢,特别是流动相发生变化时; |
6.用中等强度的溶剂进行冲洗,更改流动相时,在分析前用10~20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗; |
7.流动相污染、变质或由低品质溶剂配成; |
7.检查流动相的组成;使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂; |
8.样品中有强保留的物质(高K’值)以馒头峰样被洗脱出,从而表现出一个逐步升高的基线。 |
8.使用保护柱,如有必要,在进样之间或在分析过程中,定期用强溶剂冲洗柱子。 |
9.使用循环溶剂,但检测器未调整。 |
9.重新设定基线;当检测器动力学范围发生变化时,使用新的流动相; |
10.检测器没有设定在最大吸收波长处; |
10.将波长调整至最大吸收波长处; |
原因 |
解决办法 |
1.在流动相、检测器或泵中有空气; |
1.流动相脱气。冲洗系统以除去检测器或泵中的空气; |
2.漏液 |
2.见第三部分;检查管路接头是否松动,泵是否漏液,是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要,更换泵密封。 |
3.流动相混合不完全 |
3.用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂 |
4.温度影响(柱温过高,检测器未加热) |
4.减少差异或加上热交换器 |
5.在同一条线上有其他电子设备 |
5.断开LC、检测器和记录仪,检查干扰是否来自于外部,加以更正。 |
6.泵振动 |
6.在系统中加入脉冲阻尼器 |
原因 |
解决办法 |
1.漏液 |
1.见第三部分。检查接头是否松动,泵是否漏液,是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要,更换密封。检查流通池是否漏液。 |
2.流动相污染、变质或由低质溶剂配成 |
2.检查流动相的组成。 |
3.流动相各溶剂不相溶 |
3.选择互溶的流动相 |
4.检测器/记录仪电子元件的问题 |
4.断开检测器和记录仪的电源,检查并更正。 |
5.系统内有气泡 |
5.用强极性溶液清洗系统 |
6.检测器内有气泡 |
6.清洗检测器,在检测器后面安装背景压力调节器 |
7、流通池污染(即使是极少的污染物也会产生噪音。) |
7.用1N的硝酸(不能用磷酸)清洗流通池 |
8.检测器灯能量不足 |
8.更换灯 |
9.色谱柱填料流失或阻塞 |
9.更换色谱柱 |
10.流动相混合不均匀或混合器工作不正常 |
10.维修或更换混合器,在流动相不走梯度时,建议不使用泵的混合装置 |
原因 |
解决办法 |
1.流动相组成变化 |
1.重新制备新的流动相 |
2.流动相流速太低 |
2.调节流速 |
3.漏液(特别是在柱子和检测器之间) |
3.见section 3。检查接头是否松动、泵是否漏液、是否有盐析出以及不正常的噪音。如果必要更换密封。 |
4.检测器设定不正确 |
4.调整设定 |
5.柱外效应影响 a.柱子过载 b.检测器对反应时间或池体积响应过大 c.柱子与检测器之间的管路太长或管路内径太大 d.记录仪响应时间太长 |
5. a.小体积进样(例如:10μl而不是100μl)以1:10或1:100的比例稀释样品 b.减少响应时间或使用更小的流通池 c.使用内径为0.007~0.01的短管路 d.减少响应时间 |
6.缓冲液浓度太低 |
6.增加浓度 |
7.保护柱污染或失效 |
7.更换保护柱 |
8.色谱柱污染或失效,塔板数较低 |
8.更换同样类型的色谱柱。如果新柱子可以提供对称的色谱峰,则用强溶剂冲洗旧柱子。 |
9.柱入口塌陷 |
9.打开柱入口,填补塌陷或更换柱子 |
10.呈现两个或多个未被完全分离的物质的峰 |
10.选择其它类型的色谱柱以改善分离效果 |
11.柱温过低 |
11.提高柱温。除非特殊情况,温度不宜超过75℃ |
12.检测器时间常数太大 |
12.使用较小的时间常数 |
原因 |
解决办法 |
1.流动相污染或变质(引起保留时间变化) |
1.重新配置流动相 |
2.保护柱或分析柱阻塞 |
2.去掉保护柱进行分析。如果必要则更换保护柱。如果分析柱阻塞,可进行反冲。如果问题仍然存在色谱柱可能被强保留的污染物损坏,建议使用恰当的再生程序。如果问题仍然存在,进口可能阻塞了,更换入口处的筛板或更换色谱柱。 |
原因 |
解决办法 |
1.检测器衰减设定过高 |
1.减少衰减的设定 |
2.检测器时间常数设定太大 |
2.设定较小的时间常数 |
3.进样量太少 |
3.增大进样量 |
4.记录仪连接不当 |
4.使用正确的连接 |
原因 |
解决办法 |
1.检测器衰减设定过低 |
1.采取较大的衰减 |
2.进样过多 |
2.减少进样量 |
3.记录仪连接不正确 |
3.正确连接记录仪 |
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