DNA凝胶回收即从琼脂糖凝胶中提取DNA的过程，大致经过切胶、溶解、离心分离等步骤，常规回收过程一般使用试剂盒实现，其常见问题及注意事项如下：

1.对于需要回收的DNA，跑胶时应选择梳齿宽、薄的梳子，同时保证上样量充足。

2.切胶过程中，若不确定条带具体位置，可在紫外照射下进行，快速切胶，防止紫外照射时间过久导致DNA变性。同时，切胶的刀片保持干净，防止污染，切胶时尽量只切有条带的胶，减小切胶体积，但务必保证将条带胶全部切下，将切下的胶块切小后全部收集到离心管内。

3.加入溶解液溶胶时，在55℃-65℃的水浴（具体温度由说明书决定）中进行，同时2-3min震荡混匀一次，保证琼脂糖凝胶充分溶解，否则易导致回收效率过低，正常全部溶解后溶液呈淡黄色。

4.过柱过程中保持柱子和回收管干净，每一步充分离心，同时保证每一步加入正确的试剂。

5.洗脱液提前在55℃-65℃水浴中温浴。

6.加入洗脱液前，将柱子开盖，室温晾5-10min左右，最大程度上将酒精挥发干净，酒精污染也是后续影响A260/A230比值的重要因素。

7.加入洗脱液体积不宜太多，以30-50μl为宜，洗脱液太多会造成回收浓度过低，洗脱液量太少则不宜洗脱，加入洗脱液时快速垂直滴到膜中央。加入后需静置一定长的时间，充分洗脱。同时，洗脱液最后也可用实验用的超纯水，但需保证PH值在7.0-8.5之间。

8.测浓度时，重点关注A260/A280的比值，以1.8-2为宜。若回收成功无污染，A260/A230比值一般在1.8以上。

9.凝胶回收试剂盒中，部分试剂需加入无水乙醇后再使用，同时注意试剂需在有效期内。

在实际胶回收的过程中，按说明书常规操作也会出现回收效率低、回收产物污染等情况，以我做实验为例，在回收过程中均按说明书操作，测浓度时比值较低，如下图所示：

在经过重复实验比值仍未提高的基础上，我们继续往下做了后续的实验，对后续的实验影响不太明显。同时，为提高A260/A230的比值，我们在回收结束后继续做了纯化，也由试剂盒完成，纯化后DNA浓度会比纯化前更低，但比值正常，因此在实际DNA凝胶回收的过程中，可根据回收前的DNA浓度选择是否进行二次纯化。