程序性死亡配体1（programmed - death ligand 1，PD-L1）是程序性死亡受体1（programmed - Death 1，PD 1）的主要配体，为Ⅰ型跨膜蛋白，参与细胞调节和免疫反应，广泛表达于抗原提呈细胞和非淋巴组织等。PD-1与PD-L1结合后，下游的脾酪氨酸激酶和磷脂酰肌醇3激酶发生去磷酸化，从而传递抑制性信号，发挥负性调节作用。肿瘤细胞可能表达PD-L1，PD-L1与PD-1结合，使肿瘤细胞逃避T细胞的攻击。PD-1/PD-L1通路的阻断现已证明可用于多种癌症类型的治疗，肿瘤细胞和/或肿瘤相关免疫细胞的PD-L1表达水平与免疫治疗疗效及患者预后密切相关。国内外指南文件和专家共识推荐将PD-L1作为多种肿瘤免疫治疗的生物标志物，以识别或辅助预测可能从免疫治疗中获益的患者。免疫组织化学方法是评估PD-L1表达状态的有效且最常用方法。

目前我国已批准丹麦DAKO、美国Ventana、厦门艾德、苏州迈杰公司生产的多项检测试剂，用于纳武利尤单抗等免疫抑制剂的伴随诊断或补充诊断。此类产品较一般免疫组织化学检测试剂而言，具有预期用途变化快、评分规则复杂、阳性判断值来源于药品临床试验三个突出特点。针对PD-L1检测试剂的特殊性，注册审评应予以特殊关注并提出相应的研究要求。

一、产品技术要求

产品技术要求应主要包括以下性能指标：外观、符合性、批内重复性、批间重复性、稳定性等。考虑到PD-L1表达在不同肿瘤组织存在差异，其中“符合性”和“重复性”指标，应明确采用包含不同表达水平的适用肿瘤组织类型组织片进行检测。

二、分析性能研究

（一）免疫反应性

1.正常组织：对30种正常人体组织，每种组织类型不少于3例，进行特异性评价，同时对着色位置及染色特点进行描述。

2.非正常组织：对相关良性、恶性病变组织进行特异性评价。如有采用申报产品为试验材料进行研究的相关文献资料，也可提交文献资料验证抗体试剂或检测试剂盒与非正常组织的免疫反应性。非正常组织包括：肾上腺皮质癌、星形细胞癌、基底细胞癌、鳞状上皮癌、大细胞癌、胸腺瘤、乳头状腺癌、小细胞未分化癌、鳞状细胞癌、子宫内膜透明细胞癌、移行细胞癌，淋巴瘤、恶性室管膜瘤、间质肉瘤等。

（二）特异性

1.交叉反应研究

应进行与PD-1、PD-L2的交叉反应研究，可利用免疫组织化学方法对表达不同蛋白的细胞/组织检测，验证抗体的特异性。也可利用其它合理的方法进行交叉反应研究。

2.特异性识别研究

采用免疫印记法或酶联免疫法验证检测试剂可特异性检测PD-L1的性能。通过添加PD-L1抗原进行检测或检测PD-L1基因敲除肿瘤细胞等方法，验证检测试剂的特异性。

（三）精密度

考虑到不同PD-L1检测试剂的评分规则具有较大差异，临床中PD-L1表达情况的判读在室间和人员间存在明显差异，此类试剂的精密度评价应更加充分，并在试验设计中考虑各项影响因素。精密度研究应采用随机盲法进行，样本应为消除识别信息的预期样本（未染色样本），包括阴性、阳性及一定数量（建议不少于总样本量的20%）阳性判断值附近样本，研究数据应包含染色强度、评分结果及着色位置，采用合理的统计方法（如Wilson Score法）计算阴性一致率百分比（Negative Percent Agreement，NPA）、阳性一致率百分比（Positive Percent Agreement，PPA）、总体一致率（overall agreement, OPA）及双侧95%置信区间，并统计不同表达范围水平%的一致率。研究应制定适当的接受标准，建议一致率95%置信区间下限不低于85%。

1.内部重复性

（1）检测内精密度：对连续切片的预期组织类型样本，进行检测重复性研究。

（2）检测间精密度

对可能影响检测精密度的主要变量进行验证，包括批次（不少于3批次）、适用机型、操作方法（手工/自动）、日间和阅片者间。同一阅片者两次阅片之间应设置合理的清除期。

2.外部重复性

在至少3个外部检测实验室进行研究，研究应包含对非连续日间、不同阅片者间、不同外部实验室间的评价。

（四）灵敏度

研究对不同分期、原发性和转移性肿瘤的预期组织类型样本的检出能力。研究样本应包含不同表达水平%（0至100%）和染色强度，并计算所有样本检测的阳性率和不同染色强度的阳性样本比例。

（五）参加国内外质控机构的质控活动情况

建议企业积极参加国内（卫生计生委病理质控评价中心）、国际质控机构（NordiQC、UK NEQUAS、CAP等）的质控活动，并提交质控结果报告。

三、阳性判断值研究

此类产品的阳性判断值在药品的临床试验中确定，来源于药物临床试验的疗效数据。典型的阳性判断值研究包含建立和验证两部分，两部分研究样本应相互独立。

建立阳性判断值使用的样本应满足药物临床试验设计并考虑到不同的地理区域、民族（种族）、性别、年龄、不同病理分期等因素。可采用基于评价指标如客观缓解率（ORR）的最佳总体反应绘制受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic curve,ROC）的分析方式来选择确定合理的阳性判断值。

申请人也可参考既往经验或已上市同类产品，通过ROC的分析方式来拟定申报产品的阳性判断值，招募受试者直接进入主要疗效临床试验，并对参考区间进行验证。