下面总结了几点关于培养基适用性试验时会经常遇到的问题，以及如何解决它们。

问题 1：自制培养基平皿表面水珠凝聚，造成涂布培养后菌落蔓延无法计数。

原因分析：主要是培养基浇碟子时，培养基温度过高造成的。

解决办法：规范培养基制备流程。

▶ 推荐的培养基制备流程：

1、上午11点开始用干粉培养基天平称重，11点20开始灭菌，13:00结束后立即开锅，在灭菌锅中冷却至13:30（灭菌锅虚掩）。

2、将自制培养基和对照培养基置于50℃水浴锅中待用。

（知识点：灭菌锅灭菌结束时，需要及时开锅，避免培养基长时间在灭菌锅中缺氧，造成培养基品质下降，培养基适用性失败且影响实验结果。）

▶ 培养基浇碟：

1、50℃水浴锅取出后，一般5分钟之内将培养基浇置空平皿中。平皿冷却后，观察培养基表面有无水珠，若无水珠则可直接进行涂布操作。多余的培养基可以放置在生物安全柜中或置密封袋（不是呼吸袋）里2-8℃保存。

2、需要当天使用则打开平皿盖，轻轻甩掉表面的水珠，在运行的生物安全柜中放置0.5-1h直到表面没有水珠，然后进行涂布计数。

3、若不需要当天使用：

（1）直接放置在生物安全柜中，盖上平皿，生物安全柜关机，7天内使用。

（2）装入自封袋中保存在2-8℃冰箱中，2周内使用。使用前，提前一天取出，使平皿中水珠自动蒸发消失。

图1 常见培养基灭菌制备流程图

问题 2：培养后计数结果超标

原因分析：培养后没有每天上下午观察计数，没有掌握计数规则。

解决办法：每天上下午观察，掌握计数规则。

图2 定量菌株推荐使用流程图

▶ 知识点：黑曲霉和白色念珠菌容易在底部聚集，使用前一定再要涡旋10s。  

问题 3：培养后无法计数或计数结果统计错误

原因分析：培养后没有每天上下午观察计数，没有掌握计数规则。

解决办法：每天上下午观察，掌握计数规则。

 表1 培养基适用性的常见菌株生长特点

▶ 计数结果判定：

两个平行平板的菌落数平均值不小于15，两个平板的菌落计数结果不能相差1倍或以上。

举例：

表2 平皿样本可接受性评估

▶ 建议定量菌株的计数结果控制在20cfu以上，原因是20cfu以下微生物结果的不确定度就增大，结果可信度降低。USP <1227>章节中示例，当平板菌落数小于 25 cfu/皿时，误差大于 20%，因此平板菌落数较少时，误差较大，不宜作为计数结果报告。

▶ 定量菌株随着保存时间的增加，数量在逐渐减少。可以采用增加吸取体积的方法。