细胞培养过程中常见的可造成污染的微生物包括细菌、真菌、支原体、酵母等，不论是哪种污染，均会造成细胞生长变慢、培养基浑浊、细胞变形等不利于细胞生长的现象，更有甚者可能会出现污染同培养箱内别的细胞的现象，因此，细胞培养过程中应树立严格的无菌意识，尽量避免造成细胞污染。

准备处理细胞前，有如下几点注意事项：

1.细胞培养应在细胞房内进行，同时细胞房应保证环境状况良好，空气干燥。

2.进入细胞房前应在缓冲间穿戴细胞房专用隔离衣、专用拖鞋，戴好一次性口罩及手套。

3.细胞房应配置75%酒精喷壶，打开细胞培养箱前应使用75%酒精全面消毒双手，同时对细胞培养箱外侧进行消毒。

4.细胞操作过程中所使用的耗材如枪头、Ep管、冻存管、离心管等均要求无菌，使用到的仪器如离心机、移液器、水浴锅等均为细胞房专用仪器。

5.处理细胞等一系列操作均应在生物安全柜内进行。

6.细胞培养箱内应加入硫酸铜溶液，防止细胞污染，同时，每天处理细胞的同时注意观察CO2罐的容量，若不足及时更换。

开始处理细胞到结束的过程是细胞最容易出现污染的环节，因此需格外注意操作，注意事项如下：

1.开始操作前，生物安全柜内放入需要的物品，开启紫外灯消毒30min。

2.消毒结束后，用75%酒精浸泡的棉球或纱布擦拭台面，后面所有放入生物安全柜内的物品均需酒精喷洒消毒。

3.对于一般的细胞来说，正常培养的过程中均应在培养基中按比例加入青霉素链霉素双抗，防止细胞出现细菌污染。

4.在处理细胞的过程中，小心操作，移液器枪头不能碰到生物安全柜内任何物品，若有碰到应及时更换，同时，吸取不同液体时注意及时更换枪头，防止出现交叉污染。

5.所有培养基配置完成后建议分装使用，每次实验结束后剩余培养基、胰酶等均用封口膜进行封口。

6.处理细胞完成后，使用75%酒精浸泡的纱布仔细擦拭台面，最后开启紫外灯消毒。

7.在所有人结束细胞实验后，细胞房内应严格消毒，将84消毒液或新洁尔灭稀释后擦拭桌面，再用专用拖把拖地，最后开启紫外灯消毒。

细胞操作整个过程较为简单，但操作需要注意很多细节，细胞污染可能避无可避，一旦出现了细胞污染，建议尽早扔掉细胞并对培养箱进行消毒。

参考资料：

https://www.technologynetworks.com/cell-science/how-to-guides/how-to-prevent-cell-culture-contamination-htg-299231

https://images.app.goo.gl/LAD7xL2hQDxDwgf47

https://www.nature.com/articles/d42473-019-00306-1