分析方法验证是在药品研发和新药申报的关键技术资料之一，验证方案设计是其中的重难点所在。在符合法律法规和监管机构要求的最根本前提下，采取不同的思路对于各种不同属性的药品和方法进行验证设计都是可行的。本文试图在合规性与验证工作量的平衡中，寻找方法验证中的合并设计方案，为大家提供一种参考的解决方案。

一、合并设计的理论基础

本质上，分析方法验证（包括确认、转移）的根本目的在于向监管机构和自己证明所采用的方法是经过验证，建立的方法适合于相应检测要求，所获得的分析检验结果是稳定和可靠的。

在分析方法验证中，除法规和指南的最基本要求之外，还需要对分析方法程序中的风险点（如指南要求之外的样品稳定性、滤膜吸附、残留等）进行考察，覆盖分析方法的设计用途（工艺验证、放行检测、稳定性考察等）和所检测的所有样品（包括原料药、成品、中间过程控制样品、稳定性考察样品等）。

除专属性以外，其他的核心验证项目之间具有一些重复交叉的工作。如果按照指南的规定一步步地实现各验证项目，当然是一种稳妥的方法，但可能会造成人力和时间成本的极大浪费。各个验证项目之间的本质还是对试验中的系统变量和/或随便变量进行考察，因而具有联合设计的可能，而且这种合并设计还具有很强的模块性，有助于加深对方法验证的理解。下面以常见的含量测定和杂质定量方法来谈下合并设计的案例，包括准确度、精密度（包括重复性、中间精密度和重现性）、线性、范围和一部分的定量限和耐用性等验证项目。

二、合并设计的案例

表1中合并设计同时考虑到了含量水平、不同实验员、不同试验日期，进行常规方法设计中的线性、范围、重复性、中间精密度和定量限的内容。同时通过在不同批次试验中使用不同仪器（如HPLC）、耗材（如色谱柱）和试液（如流动相），对耐用性进行考察。4个分析批次的数据可以支撑同时得到以上验证指标，各方法验证项目的报告指标见表2。

三、合并设计的讨论

合并设计并不是就一成不变的，其仅仅是一个思路，把分析方法验证中的各种模块整合起来而已。其可以进一步考虑多种因素进行调整，如：

1、以上含量水平、实验员、日期、仪器、耗材、试液的设计仅为通常设计，均可以根据方法和样品进行调整。如含量水平只需覆盖质量标准即可；可以采用3名实验员在不同日期分别执行1个分析批次；仪器可以根据实验室实际情况调整台数；耗材可以考虑不同厂家或同一厂家不同批次；试液的使用可以自行配置不同pH、盐浓度，以进一步提高设计中的专属性。

2、不同浓度各3份样品为满足ICH Q2（R1）、ChP 2020的最低要求。若为早期研发和IND阶段的确证性方法验证，则可以采取如围绕测定值的50%、75%、100%、125%、150%五个点各3份平行样品，仅100%的点在A1D1、A2D2各测6份样品（2个分析批次，共12个数据）。该设计可以有效减少工作量，特别是质量标准和检验方法尚未完全确定的阶段。考虑到法规上的风险点，可以只考虑在方法通量较小、工作量大的情况下进行简化。

3、若为申请NDA上市的关键方法验证（或分析通量不受限制），则可以均采用6份平行样品进行测试（如100%水平，6份平行样品为ICH Q2（R1）推荐的重复性的另一个标准）。加大样品数量可以有效降低系统的随机误差，减小相对标准偏差的报告值，更有利于数据的合格。此外，还可以采用模块化设计，即有不同实验员在不同日期分别执行共4个分析批次50%、75%、100%、125%、150%五个点各6份平行样品，当然这会在工作量上造成较大的提高。

4、分析方法验证的耐用性部分可以考虑在分析方法开发时完成，可以考虑釆用均匀设计确定主要影响因素，再通过单因素分析等确定变动范围，并在方法开发的最后阶段应进行分析方法预验证。在进行分析方法验证、确认和转移时应提交合规、完整的分析方法开发报告。减少的耐用性试验工作可以用来完善中间精密度、重现性等试验设计。

5、关于生物活性/效价的方法验证，可以参见ChP 2020的9401 生物制品生物活性/效价测定方法验证指导原则，其范例中对相对准确度、精密度、线性和范围等4个指标的验证进行合并设计，并有着十分完整的统计学思路。

6、关于方法验证中的数据要求，建议结合一般的统计学分析如95%CI、残差、概率、总误差等，而不仅仅是报告回收率%和RSD%。关于统计学指标，部分可以参见作者以前的文章。

四、小结

对分析方法验证进行合并设计，可以再和规定和工作量之间取得一个较好的平衡，并可以通过合并设计有效地解决方案设计中的思路问题，加深实验人员对于验证和项目的把控，并较少地破坏验证的合规性，是值得大家进一步去思考的一种解决方案。

参考文献

ICH Q2（R1）Validation of Analytical Procedures Text andMethodology

ChP 2020 9101 分析方法验证指导原则

USP1200 Requirments for compendial validation

ChP 2020 9401 生物制品生物活性/效价测定方法验证指导原则

alamo，分析方法验证中的统计指标，药事纵横