肼、酰肼和腙（结构见图2）具有基因毒性警示结构，是一种已知的GTI，具有潜在的致癌性。

抗肿瘤药物舒尼替尼、抗精神病药物齐拉西酮使用肼作为还原剂；肼作为中间体通过酰肼的形成西格列汀、异烟肼，通过肼解作用生产抗艾滋药物沙奎那韦、莫非吉兰，通过亲电加成作用生产舒立托唑，通过杂环环化生产西地那非。肼是抗高血压药物肼嗪、抗结核药物异烟肼、苯并嗪和异碳氧嗪的主要水解降解产物。

肼类GTI的分析具有挑战性。第一，肼极性大，相对分子质量低，无发色团，极性大；第二，肼类GTI的反应活性较强，易发生副反应而造成假阳性的结果；第三，肼类GTI的碱性较强，容易与色谱柱上的硅氧基发生相互作用，造成峰形拖尾；第四，药物中GTI的允许含量在低1×10−6。

2.肼类GTI的分析方法

2.1直接法

（1）离子色谱

Lakshmi等采用离子交换色谱法-电导检测器测定西那普利中残留肼，定量限4.63μg/mL。然而，常规的离子色谱法直接测定药物中的肼类GTI存在检测灵敏度不高的问题，因此需要采取其他方法进行测定。

（2）衍生法

苯甲醛具有高的反应性，可以与活性较低的肼类GTI发生衍生化反应，是常用的衍生化试剂。Cui等选苯甲醛为衍生化试剂，将肼和乙酰肼转化为1，2-二苄基亚苯基肼和亚苄基乙酰肼，但样品在衍生化制备时，基质效应大，衍生化试剂会与样品中的其他物种发生反应，导致假阳性反应，或者衍生化反应可能无法继续完成，导致假阴性反应。样品基质中存在API的反离子，加入苯甲酸酸化衍生化反应介质，在原料药盐存在和不存在的情况下，化学衍生化反应速率相似，回收率数据更为准确。最终，使用LC-MS在痕量水平测定肼和乙酰肼的含量，肼和乙酰肼的检测下限分别为0.1、1μg/mL。

Wang等选用2-羟基-1-萘甲醛为衍生化试剂，将发色团连接到肼上，所得的氢化产物在可见光范围内波长406/424nm处具有最大的紫外吸收。由于大多数药物和杂质的紫外吸收率在190～380nm，因此基质的干扰最小，得到了合适的选择性。检测限为0.25μg/。

Tamas等［24］选用苯甲醛将杂质衍生化为强紫外吸收的苯甲醛嗪，采用液相色谱法测定别嘌呤醇中的肼。采用C18固相萃取制备样品，由于别嘌呤醇比苯甲醛嗪的极性大，因此很容易从固相萃取中洗脱出来，从而去除大量的别嘌呤醇。检测限低于1×10−7。这种方法适用于其他比苯甲醛嗪更具极性、在水溶液中高浓度可溶的原料药。

有文献采用苯甲醛作为衍生化试剂，用GC法测定肼嗪和异烟肼中的肼。但是研究员们常用丙酮或丙酮-d6作为衍生化试剂。这是因为肼、甲基肼是很强的还原剂，与丙酮以SN2亲核取代反应进行，反应迅速。有文献表明，肼和丙酮在水溶剂中的定量反应在2min内完成。所得的衍生化产物丙酮嗪、丙酮甲酰肼稳定且具有挥发性，适合于GC分析。

3. 总结

肼类GTI的控制核心在衍生化试剂的选择与反应条件选择，样品前处理。

参考文献：药物中肼类基因毒性杂质分析研究进展 刘爱赟，袁永兵，靳文仙，张 博，郑永刚，吴 赟