正确的实验设计对完成整个实验十分重要，接下来我以研究某肿瘤为例，分享实验设计的基本原则及经验。

1.在开始选题前，大量阅读行业高分论文，明确已发表的成果、已研究的方向，避免进行重复无效的研究。

2.和导师具体商定最后的选题，对于肿瘤来说，一般方向为某基因对某肿瘤进展过程影响的研究，但对于基因的选择，一般由课题组前期研究结果、导师或生信分析而来。

3.研究基因确定后，可开始进行实验，同时需要考虑最后的大论文题，可边做边逐步缩小题目范围。

4.整体实验设计为：

选题确定后可着手买试剂、设计引物等，可多阅读一些文献，在能力范围内选择较好的试剂。

实验之初选取肿瘤细胞系4-6种，通过Wb和qpcr分别验证基因在细胞系中的表达情况，后续实验选择基因表达较高及较低两个细胞系，高表达的后续做基因敲减，低表达的做基因过表达。

细胞表型实验：运用两种细胞系分别做表型实验，细胞常规表型包括细胞增殖（cck8、细胞活力、MTT、细胞克隆形成、细胞计数等）、细胞侵袭（Transwell实验、Boyden实验等）及细胞迁移（细胞划痕实验、伤口愈合实验等）。

注意：细胞表型是实验刚开始的部分，若敲减或过表达某种基因使细胞的表型发生非常明显发变化，可着手一边继续验证表型，一边送三方公司测序，减少后期等待时间。

细胞敲减及过表达均有瞬时敲减/过表达及稳定敲减及过表达，为减少后续实验的时间，省去瞬时敲减繁琐的流程，应同时准备构建稳转细胞株。

在完成常规的细胞表型实验后，详细分析测序结果，从中寻找可能引起上述细胞表型的机制。同时，也可根据测序结果继续验证表型，如测序结果和细胞周期基因相关，可以通过流式细胞术检测细胞周期变化，也可通过Wb检测周期相关蛋白变化。

引起肿瘤细胞发生变化的机制数不胜数，每一个课题所能研究出的结果都较为表面，可根据测序结果，推测可能机制，或可能和哪条信号通路相关，然后进行机制相关验证，保证研究内容形成闭环。

5.一些建议：

关于初期的表型验证：不能以一次实验结果作为最后的结果，若第一次验证表型无明显变化，先检查实验流程、试剂、实验操作有无问题，不能以一次结果否定整个课题。当然若表型验证实在没有变化，及时和导师讨论更改课题。

稳转细胞株有很多种方法可以实现，选择熟悉的方法即可。

所有实验的原始记录一定要保存好，即使是无意义的结果。