胶乳试剂研发流程及要点

胶乳免疫比浊法是目前非常主流的一种免疫检测方法，它的基本测定原理是：抗原抗体在缓冲液中快速形成抗原抗体复合物，使反应液出现浊度，透光率下降。在一定的比例范围内，反应液的浊度和抗原抗体的量呈线性相关关系。

实际使用中，一般保持反应液中抗体过量，形成的复合物会随着样本中抗原量增加而增加，反应液的浊度亦随之增加，与一系列的标准品对照，即可计算出受检物质的含量。

胶乳比浊试剂研发周期长，步骤复杂，需要关注的因素较多。今天小编就为大家梳理一下胶乳免疫比浊试剂的研发流程，希望对各位老师的研发工作有所帮助。

01 项目立项

这一步一般是公司的市场部或者研发主管根据公司的规划或者市场情况，选择做某个系列的某些项目，在此不过多介绍。

02 选择抗原、抗体、胶乳微球

胶乳比浊试剂研发最重要的步骤就是抗原抗体和胶乳微球的选择。常规生物原料方面，国内的原料厂家已经做得相当不错，性价比高，且货期、售后都更有保证。但遇到特殊项目，就需要在全球范围内寻找了。

抗原抗体的选择主要是对比其特异性。我们需要特异性强的抗体，但并非越强越好。抗体特异性强，灵敏度高。但过高的特异性会导致试剂的信号过高，在高浓度时容易超出仪器的检测限，出现阴阳性区分不开的问题。

在胶乳微球的厂商中，虽然近几年国内外都有不少新厂商涌现，但JSR仍然是全球最主要的胶乳微球生产供应商。在时间成本高昂的生化试剂研发中，选择一家可信赖的厂商，可以节省下很多研发时间。选择胶乳微球，主要是对比粒径：粒径越大，灵敏度越高；粒径越小，线性越长。一般情况下，灵敏度大于100ng/mL的，可以试用200nm以下的微球，灵敏度小于100ng/mL的可以先试用200nm以上的微球。当一个微球没办法同时满足灵敏度和线性要求时，可以大球和小球混用，多为小球中混入大球。（注意：相同粒径的微球，也有可能因为表面羧基含量的不同而表现不一样。）。

常见胶乳比浊法检测项目

03 确定反应流程

胶乳比浊试剂不同项目的反应流程大致是一样的，一般分为1步法和2步法。2步法会比1步法多出1-2步离心、重悬的步骤（具体步骤与磁珠包被抗体的1步法和2步法类似，详情可点击如下链接查看→技术丨化学发光免疫分析中羧基与Tosyl磁珠包被抗体方法及注意事项）。微球粒径越小，越难离心。所以一般情况下，使用大粒径微球，试剂性能要求高的项目倾向使用2步法，使用小粒径的项目倾向使用1步法。

04 调整反应条件

影响试剂性能的除了前面提到的抗原、抗体和胶乳微球外，还有各步反应的条件，比如PH，活化剂用量，温度，反应时间，溶液的离子强度，抗体用量，封闭缓冲液或者封闭剂的选择等等（封闭剂如何选择的相关内容可点击如下链接查看→头条丨天然VS合成：封闭剂如何选？）。每个条件都需要优化到较好的状态且达到平衡，才能长时间的保持试剂性能的稳定。

05 验证试剂性能

试剂性能的验证包括包被结束时和对照试剂的对比以及长期稳定性的监测。一般长期稳定性检测至少要在1年以上。经过1年的低温保存，性能和初始时相差在要求范围内则可认定合格。在化学领域，化学物质在37℃保存1周可以近似于在2-8℃保存1年。但生化试剂中包含各种蛋白质，没有办法简单地将37℃保存1周和2-8℃保存1年划上等号。所以虽然很多厂家会通过37℃-1周的加速实验来快速验证试剂的稳定性，但是提交注册，必须要拿到1年以上的实时稳定性数据。